电动胶束色谱中弱酸性化合物的柱上浓缩富集技术的研究.pdfVIP

电动胶束色谱中弱酸性化合物的 柱上浓缩富集技术的研究* 吴慧芳 关福玉* 罗 毅 军（事医学科学院毒物药物研究所 北京 100850） 提要 提出一种电动胶束色谱 MEKC）中弱酸性化合物的柱上浓缩富集技术，并得到实验证实。以七种弱酸性 巴比妥类药物的MEKC分离为例，考察了样品溶剂中表面活性剂浓度、pH值和离子强度等对富集作用的影响。 表面活性剂浓度、pH值对富集效应的影响较大。采用低浓度 略（高于CMC点）表面活性剂、低浓度缓冲液作样 品溶剂，调节溶剂pH值小于待测化合物的pKa-1就可以对弱酸性化合物进行柱上富集。采用这种富集技术， 可以压缩样品带的宽度从而提高柱效，在此基础上可通过加大进样量提高化合物的检测灵敏度。这种方法不仅 适用于弱酸性有机化合物，也可用于弱碱性有机化合物的柱上浓缩富集。 关键词 高效毛细管电泳，电动胶束色谱，柱上富集，巴比妥类药物 含缓冲液、低浓度 略（高于CMC点）的表面活性剂 1 前言 作样品溶剂，由于化合物的脂溶性较强，易溶于胶束 电动胶束色谱 MEKC）是一种高效、快速的分 相中，则进样后施加电压的瞬间由于样品带的电阻 离技术，一般采用紫外检测器，进样量也比较小，因 高、电压降大，造成荷负电的胶束相携带中性分子样 而检测灵敏度较低。提高灵敏度有两条途径：一是发 品在样品带与高离子强度的运行缓冲液界面处富 展高灵敏度的检测器；二是采用柱上浓缩富集技术 集[]。 o（ncolumnstacking，以下简称柱上富集）。后者是 2.2 弱酸性和弱碱性化合物的柱上富集 一种简便易行的技术途径。样品的富集技术在毛细 由于弱酸弱碱存在酸碱平衡关系，若直接用上 管区带电泳 C（ZE）中研究较多[15]，基本方法是提 述富集技术，不能达到最佳富集效果。为此我们提出 高运行缓冲液的离子强度。文献[6]借鉴了CZE富集 用含有低浓度缓冲液和低浓度胶束的溶液作样品溶 原理和方法，用于MEKC中离子型有机化合物。最 剂的富集方法。对于弱酸性化合物的富集，将样品溶 近文献[研究了中性分子的MEKC富集技术。本文 剂pH值调至小于pKa 1╬pKa为所测化合物中最 在中性化合物的MEKC富集原理基础上，以七种弱 低者）。这样，化合物将主要以分子形态存在 根（据酸 酸性巴比妥类药物的MEKC分离为例，对样品溶剂 碱平衡原理可导出，[HA]/[A-1]大于90%），解 中表面活性剂浓度、pH值和离子强度等进行了研 于胶束相中。在进样后施加电压的瞬间，胶束相携带 究，提出了弱酸性化合物的富集技术。采用这种富集 样品分子在样品带与缓冲液的界面处富集。对于弱 技术，可以压缩样品带的宽度从而提高柱效，在此基 碱性有机化合物的富集，将样品溶剂 含（有低浓度胶 础上可通过加大进样量提高化合物的检测灵敏度。 束和低浓度缓冲液）的pH值调至大于pKw-pKb +1pKw为水的质子自递常数，pKb为所测化合物 2 MEKC中样品的柱上浓缩富集原理 中最大者），使弱碱性有机化合物以分子形态存在， 就可以进行柱上富集。 2.1 中性分子的柱上富集 MEKC富集与CZE相似之处是使用高于样品 3 实验部分 溶液离子强度的运行缓冲液，但对于溶解度小的中 性分子和弱酸弱碱性化合物的富集有所不同。用不