核黄素与脱氧核糖核酸相互作用的电化学和光谱法研究.pdfVIP

第34 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究简报 第5 期 2006 年5 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 659 ～ 662 核黄素与脱氧核糖核酸相互作用的电化学和光谱法研究 # 倪永年 杜 姗 （南昌大学化学系，南昌330047 ） 摘 要 在实验条件接近人体生理环境的pH 7 . 4 的Tris-HCl 缓冲溶液中，分别采用电化学方法、紫外光谱法 及荧光法并利用中性红作电化学探针，研究了核黄素和小牛胸腺DNA 的相互作用。随着DNA 浓度逐渐增 加，核黄素的峰电流减小，峰位正移；紫外光谱产生减色效应；核黄素的荧光发生猝灭以及核黄素和中性红竞 争与DNA 相互作用等，采用几种方法的实验结果都表明两者能发生嵌插结合；多种计算方法得到两者作用的 结合位点数为 5 - 1 1，结合常数达到10 （mol/ L ） 。 关键词 核黄素，脱氧核糖核酸，嵌插，中性红，电化学探针 1 引 言 DNA 是一种重要的生物大分子，是体内抗癌药物作用的主要标靶。药物与DNA 作用能不同程度 影响DNA 的复制和合成等性质，从而抑制癌细胞的恶性生长。因此，人们越来越重视对药物与DNA 的 作用进行研究，并从中获得更方便的检测方法，使药物的初步筛选更加有效。 核黄素属于维生素类药品，常用于防治口角炎等炎症。它有可能成为肿瘤的光敏治疗药物之一。 所以，研究核黄素和 ［1，2 ］ DNA 的作用在生化及临床上都具有一定的意义。包晓玉等 研究了VB 与DNA 2 在pH 4 . 56 条件下相互作用的电化学行为。本实验应用电化学方法和光谱法并结合电化学探针中性红 研究了两者在pH = 7 . 4 的Tris-HCl 缓冲液中的相互作用，获得了该体系较全面的信息。 2 实验部分 2 . 1 仪器与试剂 CHI660A 电化学工作站（上海辰华公司）；三电极系统，玻碳电极为工作电极，Ag/ AgCl 电极为参比 电极，铂丝为对电极；LS-55 荧光光谱仪（PE 公司）；UV-8453 紫外可见光度计（Agilent 公司）。 小牛胸腺DNA（北京百泰生物技术公司）储备液用50 mmol/ L NaCl 溶液配制，浓度以ε260 = 6600 （L/ mol ）/ cm 来确定，紫外光度法检测：A260 / A280 = 1. 8 ～ 1. 9 ，纯度符合要求。核黄素（Sigma 公司）：用 水配制成2 . 66 × 10 - 3 mol/ L 的储备液；Tris-HCl 缓冲溶液：0 . 05 mol/ L （pH = 7 . 4 ）。中性红（上海试剂 三厂）储备液浓度为1. 0 × 10 - 3 mol/ L 。所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 2. 2 电化学方法实验 玻碳电极的预处理。先后用6 µm 和1 µm 的金刚砂抛光粉（BAS 公司）抛光成镜面，用二次水漂 洗。然后将电极浸入Tris-HCl 缓冲液中，连续循环伏安扫描共10 次，预处理后电极符合实验要求。 以pH 7 . 4 的Tris-HCl 缓冲液为底液，加入适量核黄素溶液，定容至10 mL ，置入电极并通氮10 min 除氧，搅拌10 s 后进行循环伏安（起始电位0 . 1V ，最高电位0 . 1V ，最低电位-