黄杆菌产异淀粉酶的性质研究.pdfVIP

一 390一 江苏农业科学 20l1年第 39卷第 4期 鄣宏文 ，江 洁，邹东恢．黄杆菌产异淀粉酶 的性质研究[J]．江苏农业科学 ，2011，39(4)：390—391 黄杆菌产异淀粉酶的性质研究 郭宏文 ，江 洁 ，邹东恢 (齐齐哈尔大学食品与生物工程学院／黑龙江省普通高校齐齐哈尔大学农产品加工重点实验室，黑龙江齐齐哈尔 161006； 2．大连民族学院生命科学学院，辽宁大连 116600) 摘要：从淀粉厂附近的土壤中筛选得到 1株产异淀粉酶的黄杆菌菌株D15。本试验将其发酵液通过硫酸铵盐析 后研究其产异淀粉酶的性质 ，结果表明：该酶在pH值6．4—8．2范围内活力较高，酶反应的最适pH值为7．0；在40～ 55℃范围内酶活力较高，酶反应的最适温度为45oC；在低于50℃及pH值5．2～8．8的条件下较稳定存在。 关键词：异淀粉酶；黄杆菌；酶性质；温度；pH值 中图分类号：Q814 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2011)04—0390—02 淀粉工业使用的淀粉酶中，一淀粉酶、p一淀粉酶只作 母粉 0．5，MgSO ·7H00．05，KHPO 0．1，pH值 7．0。 用于 一1，4糖苷键，对 一1，6糖苷键不起作用。支链淀粉 1．3 主要试剂 中的 一1，6糖苷键不被彻底分解则直接影响到淀粉的利用 支链淀粉为Sigma公司产品；其余试剂均为分析纯。 率，影响产品的质量 。脱枝酶又名为支链淀粉一1，6葡聚 1．4 方 法 糖水解酶，能催化水解支链淀粉、糖原以及相关大分子化合物 l，4．1 发酵酶液制备 将菌种 D15活化后接种到装有 中的d一1，6糖苷键。异淀粉酶(isoamylase)是一种能够专一 25mL种子培养基的三角瓶中，在34℃、180r／rain条件下振 性地切开支链淀粉分支点中的 一1，6糖苷键形成直链淀粉 荡培养18h，然后取 2mL培养液转接到装有 25mL液体发酵 的脱枝酶类。在工业生产中异淀粉酶有着广泛 的用途 ，淀粉 培养基的250mL三角瓶中，在 34℃、180r／rain条件下振荡 加工中它可用于生产直链淀粉，可与糖化酶协同作用提高糖 培养64h。得到的发酵液用4层纱布过滤，8000#rain离心 化速度；与B一淀粉酶配合使用生产麦芽糖可以大大提高麦 30rain，取上清液备用。 芽糖得率；用于啤酒外加酶法糖化过程和在酒精工业中提高 1．4．2 硫酸铵盐析 将 5mL上清液装入离心管中，加入不 出酒率 ；另外在饲用酶制剂和医药领域也有应用。国内近 同饱和度的硫酸铵，4℃静止 16h后，8000r／min冷冻离心 些年来，王弋博等分别进行了产异淀粉酶菌种选育的研究工 20min。倒掉上清液，向沉淀中加入 5mL预冷的蒸馏水 ，振 作 J，其他的关于异淀粉酶的研究报道较少。关于微生物 荡均匀后测定酶活，制作盐析曲线。根据盐析曲线结果，对发 中黄杆菌产生异淀粉酶的研究在国外早有报道 ，但国内对 酵酶液作盐析处理。 这方面的研究并不多见。笔者所在实验室从淀粉厂附近的土 1．4．3 透析 盐析后的粗酶液放入透析袋 内透析，用BaC1： 壤中分离到多株产脱枝酶的细菌菌株，并从中筛选到 1株产 检测透析是否完全 。 异淀粉酶的黄杆菌菌株 D15，其液体发酵条件下的酶活为 1．4．4 酶活的测定方法 (以葡萄糖作标准曲线) 发酵液 1．62U／mL，本试验对该菌株的产酶性质进行了初步研究。 5000r／min离心30min后取上清酶液0．2mL，加入 0．5mL 1％支链淀粉溶液和 0．3mLpH值 7．0(0．1mol／L)的磷酸缓 1材料与方法 冲液，45℃保温30r