黄瓜灰霉病拮抗放线菌7-16的筛选及发酵条件优化.pdfVIP

一 114一 江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期 关丽杰 ，谭 国梁，杨 迪 ，等．黄瓜灰霉病拮抗放线菌7—16的筛选及发酵条件优化[J]．江苏农业科学，2011，39(4)：114—116 黄瓜灰霉病拮抗放线菌7一l6的筛选及发酵条件优化 关丽杰 ，谭 国梁，杨 迪 ，李海燕，邵 双 (沈阳化工大学环境与生物工程学院，辽宁沈阳 110142) 摘要：从土壤分离得到的120株放线菌中，以黄瓜灰霉病为靶标菌，分别采用琼脂块法和杯碟法进行拮抗放线菌 的初筛和复筛，得到拮抗放线菌7—16。为提高拮抗菌株7—16发酵液抑菌活性物质的产量，通过单因素试验研究了 不同发酵温度 、时间、初始pH值、装样量、接种量等因素对产生活性物质的影响；通过L(3)正交试验得到其最佳发 酵条件为：初始pH值 7．5、发酵时问5d、发酵温度28 、装样量20mL(250mL三角瓶)。 关键词：黄瓜灰霉病 ；拮抗放线菌；筛选；发酵条件；抑菌活性 中图分类号：$436．421．1 1 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2011))【4—0114—03 放线菌产生的抗生素及其次生代谢产物在植物病害防治 7．0；培养基 3：淀粉5．0％、花生饼粉2．5％、酵母粉 0．08％、 中具有重要的作用。在 目前已发现的 1000多种微生物来源 葡萄糖 0．02％、(NH )SO 0．08％、CaCO30．32％、NaC1 的生物活性物质中，大约有超过2／3的活性物质来 自于放线 0．2％、pH值 7．0—7．2；培养基4：黄豆饼粉 3％、玉米粉2％、 菌的次生代谢物 ，如中生霉素、瑞拉菌素、抑菌霉素等 。 葡萄糖2％、(NH )2SO40．4％、CaCO30．4％、K2HPO0．02％、 但 目前，人们只分离到大约 10％～20％的土壤放线菌 。 pH值 7．0～7．2；培 养基 5：葡 萄糖 3％、玉米 粉 3％、 长期喷施化学农药，不仅污染了环境，降低了农作物产量，还 (NH )SO 0．4％、黄豆饼 粉 3％、MgSO 0．04％、酵母膏 导致病菌的抗药性不断增强，利用放线菌的次生代谢产物制 0．4％、pH值 7．0～7．2；培养基 6：麸皮 1％、淀粉 1．33％、葡 备的农药具有低毒、无残留、无污染、对非靶标生物安全的优 萄糖 0．67％、NaC10．05％、MgSO 0．05％、K2HPO 0．05％、 点，已成为未来农药的发展方向。因此 ，如何提高放线菌抗生 FeSO40．005％、KNO 0．1％、pH值 7．2～7．4。 素发酵产量 ，已成为近年许多专家研究的热点。7一l6菌株 1．2．3 不同发酵条件对抑菌活性的影响分析 采用杯碟法 是从辽宁省沈阳市附近土壤中筛选出的l株对黄瓜灰霉病具 进行分析，发酵基础培养基选用复筛中所选菌株的最佳培养 有拮抗作用的放线菌，本试验通过单因素试验和正交试验确 基 。(1)发酵时问对抑菌活性的影响：将基础培养基 pH值凋 定了其最佳发酵条件 ，为规模化生产农用抗生素提供依据。 为7．0，装样量为40mL(250mL三角瓶)，28oC、150r／min分 1 材料与方法 别发酵培养2、3、4、5、6、7、8d，生物测定确定最佳发酵时间。 (2)发酵温度对抑菌活性的影响：将基础培养基 pH值调为 1．1 材料 7．0，装样量为40mL