ATP8基因在小鼠单个GV期卵母细胞中的表达和生物信息学分析.pdfVIP

洪 灯等 ATP8基因在小 鼠单个 GV期卵母细胞 中的表达和生物信息学分析 第 17期 ATP8基因在小鼠单个 GV期卵母细胞中的表达和生物信息学分析① 洪 灯 齐亚灵 张彦慧 钟南田 郑小桃 周 雯 海南医学院组织学与胚胎学教研室 (海南 海 口) 571101 中国图书分类号 R715 文献标识码 A 文章编号2011)17-2669~3 【摘 要】 目的：探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP合酶亚基 8(ATP8)基因的表达情况及其生物信息学的分析。 方法：应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期 (germinalvesicle，GV)卵母细胞，用RT—PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8 基因的表达；将 GV期单个卵母细胞直接进行 RT合成 cDNA，然后再对 回收产物构建克隆质粒并测序，最后用 VECTORNIT 9．0、RNAdraw和Treeview等工具对测序结果进行生物信息学分析。结果 ：琼脂糖电泳结果表明ATP8基因在 GV期卵母细胞 中 有表达；测序结果显示所测昆明小鼠ATP8序列与Genbank序列完全一致 ；mRNA二级结构图显示 12种动物间的ATP8氨基酸序 列和ATP8核酸序列有较大差异，其中不同品种小鼠间也有差异；不同物种ATP8核苷酸序列构建出的分子进化树中，小鼠与棕 熊进化距离较远，与田鼠、家猫进化距离相对较近。结论：小鼠GV期卵母细胞特异表达的ATP8基因与卵母细胞的正常发育成 熟相关。 【关键词】 小鼠 生发泡 卵母细胞 ATP合酶亚基8 生物信息学 Expression ofATP8geneinsingleoocytein GV stageofmiceandthebioinformatic analysis HONGDeng，QIYa—Ling，ZHANGYah—Huieta1．DepartmentofHistologyandEmbryology，HainanMedicalCollege， Haikou571101，Hainan。China [Abstract] Objecfive：ToexploretheexpressionofATPasesubunit8(ATP8)geneinmitochondriaofoocytesingerminalvesicle (GV)stageofmiceandanalyzethebioinformatics．Methods：OocytesinGVstagewereseparatedfromovarybysqueezingmethod．RT— PCR wasusedtodetecttheexpressionofATP8geneinsingleoocyteinGVstageofmice，thencDNAwassynthesized，theproductswerere— coveredtoconstructcloningplasmidandgenesequencingwascarriedout；VECTOR NIT9．0，RNA drawandTreeview softwarewereused forbioinformaticanalysisofgenesequencingresults．Results：TheresuhsofagarosegelelectrophoresisshowedthatATP8geneexpressedin oocytesinGV stage；theresultsofgenesequencingshowedthatATP8sequenceofkunmingmicewasidentifiedwithGenbanksequenceex— actly：mRNA secondarysturcturechartindicatedthattherewasalargedifferencebetweenATP8nucleotidesequenceanditsaminoacidse— quenceof12animals，andtherewassignificanceamongthemiceofdifferentbreeds；thephylogenetictreeofATP8nucletidesequenceof variousspeciesshowedthattheevolutionarydistancebetweenmiceandbrownbearswasfar，whiletheevolutionarydistancebetweenmice andvoles，catswasnear．Conclu