十字花科黑腐病菌RNA提取与质量鉴定.pdfVIP

72 ．弩 Jo广urnaIofG农uang~AAggric．．an物aBiol．Scie学fice 20D0e8c年．．12200月8 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0456—05 十字花科黑腐病菌 RNA提取与质量鉴定 曹金如 ，廖洁 ，廖青 ，梁晓夏 ，何勇强 。，唐纪 良 。 (1 广西大学 生命科学与技术学院；2 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西 南宁530005) 摘要 ：十 字花 科 黑腐 病 菌，学 名 野 油 菜黄 单 胞 菌 野 油 菜致 病 变 种 (Xanthomonascampestris pv,campestris，简称 Xcc)，是一类 一变形菌纲的革兰氏阴性细菌，能在世界范围内侵染十字花科植物 ，给 农业生产造成重大损失。RNA是分子生物学的主要研究对象之一，提取高质量 的RNA是研究十字花科黑 腐病菌基因表达调控机理的基础 。由于 Xcc能产生大量胞外多糖及黄单胞色素，且细菌 RNA半衰期较短， 目前 尚缺少一种大量提取 Xcc高质量 RNA 的有效方法 。该研究在参考多种 RNA提取方法 的基础上 ，建立 了一种简单、有效的适合十字花科黑腐病菌RNA 的提取方法。得到的RNA样品经过紫外分光光度法和 甲 醛变性凝胶 电泳检测 ，证实为完整、均一的总 RNA，达到了表达谱分析及 cDNA文库构建的要求 。 关键词 ：十字花科黑腐病菌 ；总 RNA提取 ；热酸性酚法 中图分类号 ：Q782 文献标识码 ：A IsolationandqualityassayoftotalRNA from Xanthomonascampestrispv．campestris CAOJin—ru ，LIAO Jie，LIAO Qing ，LIANG Xiao—xia，HEYong—qiang’，TANG ji—liang’。 (1 CollegeofLifeScienceandTechnology；2 GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresources ConservationandUtilization；GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：Xanthomonascampestris pathovarcampestris (Xcc) isa yellow pigmented gram— negativebacterium thatbelongsto the 丫一subdivision ofproteobacteria．This bacterium can infect cruciferousplantsworld—wide，causingseverelossesinagriculturalproduction．RNA isanimportant geneticmaterial，thustheisolationandpurificationofRNA samplesisakeystepforelucidatingthe mechanisms of gene expression and regulation in Xcc．However， Xcc can produce more exopolysaccharidesandxanthomonadinthanmanyotherbacteria；theisolationofhigh qualityRNA from thisbacterium isdifficult．Thereisnoan efficientmethod forisolatinghigh qualityRNA from Xcc．In this study， a simple and effective method for extracting totalRNA from Xcc was established．TheisolatedRNA samplewasdetermined in integrityandpuritybyusingformaldehyde agarosegelelectrophoresisandUV spectrophoton1