猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达及其粘附相关功能初探.pdfVIP

第 29卷第 2期 上 海 交 通 大 学 学报 (农 业 科 学 版) Vo1．29No．2 2012年 4月 J0URNAL0FSHANGHAIJIA0T0NGUNIVERSITY (AGRICULTURALSCIENCE) Apr．2012 文章编号：1671—9964(2012)02—0034—07 DOI：i0．3969／J．ISSN．1671—9964．2012．02．007 猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达 及其粘附相关功能初探 张 静 ， 孙建和 (Jc海交通大学 农业与生物学院；上海市兽医生物技术重点实验室，上海 200240) 摘 要：目的：克隆、表达猪链球菌2型菌株 ZY05719的膜蛋 白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6)， 分析其重组蛋 白的生物学活性 。方法：基于GenBank中S．suisP1／7SSU1634蛋 白的基因序列设 计引物，克隆ZY05719株的毒氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析；构建pET28a—hm6原核表 达质粒，在大肠杆菌BL21中诱导表达，重组 HM6蛋 白即二氢硫辛酰胺脱氢酶用 His亲和层析镍 柱纯化后，通过SDS蛋 白电泳鉴定分析并利用新西兰大 白兔制备抗血清，研究其酶活性及其在介 导猪链球菌粘附HEp一2细胞中的作用。结果：克隆了1761bp的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因，纯化 的70kD重组融合蛋 白具有 良好的酶活性和免疫原性，且在介导猪链球菌粘附HEp一2细胞中具有 作用 。结论：成功克隆、表达予5~05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基 因，初步揭示 了其生物学活 性，为深入研究二氢硫辛酰胺脱氢酶在猪链球菌致病机制 中的作用奠定了基础。 关键词：猪链球菌；二氢硫辛酰胺脱氢酶；酶活性；粘附特性 中图分类号 ：$852．61 文献标识码 ：A ProkaryoticExpressionandAdhesionDetectionofPutative DihydrolipoamideDehydrOgenaseofSf厂epfOcOccUssuis ZHANGJing，SUNJian—he (SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaot0r{gUniversity；ShanghaiKeyLaboratory ofVeterinaryBiotechnology，Shanghai200240，China) Abstract：Tocloneandexpresstheputativedihydrolipoamidedehydrogenase(hm6)geneofStreptococcus suistype2 strain ZY05719 isolatedfrom Ziyang，Sichuan province，forthedetectionofitsfu~c．tion on , bacterialadherence，the hm6 gene fragmentwas amplified by PCR from ZY05719 and cloned into prokaryoticexpressionplasmidpET-28atoformpET28a-hm6．Theexpressionofrecombinantproteinwas inducedinE．coliBL21andwaspurifiedbyNi抖一nitrilotriaceticacid (Ni—NTA)affinitychromatography． Theexpressedand purifiedproteinswereanalyzedby SDSand it