猪乙脑病毒CSF.XZ-2D株的分离鉴定及其体外培养特性研究.pdfVIP

第 34卷 第4期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．No．4 2012年 4 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicnie Apr． 2012 doi：10．3969~，issn．1008-0589．2012．04．06 猪乙脑病毒CSF．XZ一2D株的分离鉴定 及其体外培养特性研究 滕 蔓 ，罗 俊 ，樊剑鸣z，王兴涛 ，王方雨 ，柴书军 ，杨继飞 ，张改平 (1．河南省农业科学院 农业部动物免疫学重点开放实验室 河南省动物免疫学重点实验室 ，河南 郑州 450002； 2．郑州大学 公共卫生学院，河南 郑州 450001) 摘 要：为了解河南省规模化猪场 日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征 ，本研究对临床流产胎儿脑脊液进 行病毒盲传分离，经 RT-PCR等分子生物学方法及乳 鼠感染试验 ，分 离鉴定了 1株基因Ⅲ型 JEV株 ，命名为 CSF．XZ．2D。采用BHK-21细胞对该分离株的体外培养特性进行研究，结果表明，在 25em2细胞瓶中，用 1．25× 10个细胞 ／瓶的初始量制备细胞单层 ，以较低剂量的病毒液吸附细胞并洗涤弃去游离病毒粒子，可在感染后60h 达到最大增殖量，病毒效价为 10soTCID@O．1mL以上。本研究为其他 厄V分离株的体外培养提供了参考。 关键词：日本乙型脑炎病毒；分离鉴定；脑脊液；BHK-21细胞；体外培养 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2012)04．0274．05 IsolationandpropagationofafieldJapaneseencephalitisvirus isolateCSF．XZ一2D frOm swine TENGMan，LUOJun，FANJian—ming2，WANGXing—tao，WANGFang-yu，CHAIShu-jun， YANG Ji—fei，ZHANG Gai—ping (1．HenanProvincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology，KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculturd，Henan AcademyofAgriculturalSciences，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofPublicHealth，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China) Abstract：ToinvestigatethefeaturesofJapaneseencephalitisvirus(JEV)currentlyprevalentnipigfarm inHenanprovince， htecerebrospinalfluid(CSF)samplescollectedfrom abo~edfetuseswereblindpassagedonBHK一21cells．AJEVwasisolated nad characterizedbyRT-PCR，immunofiuorescenceassay andinna imaltests．TheisolatewasnamedasCSF．XZ-2D and the phylogeneticnaalysisshowedthatitbelongstogenotypeIII．TheconditionsforhtecultureofJEV CSF．XZ一2D wereoptimizedin BHK-21cells．Theviursreplicationcurvesshowedthatthehighestviurstiterachievedabove10。TCID~0．1mLat60hours post—inoculation．whichnidicat