猪圆环病毒2型特异性IgA间接ELISA检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

第 34卷 第4期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．34．No．4 2012 年 4 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryM edicine Apr． 2012 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．04．12 猪圆环病毒 2型特异性 IgA间接 ELISA检测方法的 建立与初步应用 刘雨丰，马攀攀，陈 陆，杨 霞，姚惠霞，王川庆，赵 军 (河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002) 摘 要 ：为检测猪圆环病毒2型(PCV2)特异性 IgA抗体，本研究以纯化的PCV2Cap蛋白作为包被抗原，以 辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪 IgA为二抗，建立检测PCV2特异性 IgA抗体的间接 ELISA方法。确定最佳 抗原包被浓度为200ng／孔，HRP标记羊抗猪 IgA的最佳稀释度为 1：30000。所建立方法与抗猪瘟病毒等病原的 抗体间无交叉反应。结果表明该方法具有较好的特异性，组内和组间重复性试验的变异系数介于0．12％～5．47％， 具有较好的可重复性。该方法为进一步研究猪感染PCV2和PCV2疫苗免疫后特异性黏膜 IgA水平及进行黏膜免 疫评价提供了有效的检测方法。 关键词：猪圆环病毒2型；黏膜 IgA；间接ELISA 中图分类号 ：$855．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2012)04．0301．04 DevelopmentandprimaryapplicationofindirectELISA methodfor detectingtheIgA againstporcinecircovirustype2 LILTYu-feng，MA Pan-pan，CHEN Lu，YANG Xia，YAO Hui-xia，WANG Chuan-qing，ZHAO Jun (CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China) Abstract：AnindirectELISAfordetectingthe[gAagainstporcinecircovirustype2(PCV2)wasdevelopedbyusingpurified PCV2CapproteinascoatnigantigenandHRP-conjugatedgoatanti-pigIgAassecondnatibody．Concentrationofcoatnignatigen nad dilution ofsecond antibody wereoptimizedas200ng／welland 1：30，000 respectively．Therewasno cross—reactivitywith anti—HCV，PRRSV andohterpathogenantibodies．Thecoefficientvariationofintra—andinter-assaywasrna gedfrom 0．1233％ to 5．4766％．TheELISA describedinthisstudywasprovedtobeaspecificna drapidforthedetectionofPCV2specificIgA．Itwas potentialtobeappliedofrboht laboratorialnad field detection ofthePCV2specificIgA inducedbyPCV2 infectionorPCV2 vaccinationna devaluatingmucosalimmuneresponse． Keywords：porcinecircovirustype2；mucosalIgA；indirectELISA 猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV2) 途径感染