猪瘟病毒E2蛋白与猪RACK1相互作用的鉴定.pdfVIP

第34卷 第4期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．No．4 2012 年 4 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Apr． 2012 doi：10．39698．issn．1008—0589．2012．04．07 猪瘟病毒 E2蛋 白与猪 RACK1相互作用的鉴定 凌理军，李 素，董 泓，贺 番，冯 烁，廖亚金，中 梁，孙 元，翁长江，仇华吉’ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要 ：为筛选和鉴定与猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白相互作用的猪宿主蛋白，我们采用酵母双杂交方法筛选猪 肺泡巨噬细胞表达文库得到与CSFVE2蛋 白相互作用的宿主细胞 RACK1蛋 白，经共转化试验和 GSTpul1．down 试验进一步证实两者可以特异性结合，并且共聚焦试验表 明两者共定位于细胞的细胞浆 。本研究显示E2蛋 白与 宿主细胞 RACK1蛋 白存在相互作用，RACK1在 CSFV感染过程 中所发挥的功能有待进一步研究。 关键词 ：猪瘟病毒；猪巨噬细胞表达文库；酵母双杂交；E2蛋 白；RACK1；相互作用 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2012)04．0279．04 IdentifiCatiOnoftheinteractionbetweenclassicalswinefevervirus E2proteinandporcineRACK1 LINGLi~un，LISu，DoNGHong，HEFan，FENGShuo，LIA0Ya-jin，SHENLiang，SUNYuan， 、 NGChang~iang．QiUHua~i (DivisionofSwineInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryReserachnIstitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Hrabin150001，China) Abstract：Toscreenandidentifytheporcineprotenisinteractedwiht classicalswniefevervires(CSFV)E2protein，a potentialinteractingpartnerofRACK1wasscreenedwim CSFV E2asbaitprotein byyeasttwo-hybridfrom porcinealveolar macrophageexpressionlibrary．Theinteractionofhtewt oproteinswasfurtherconfirmedbyCO—transfomr ation．GSTpull—down and laserconfocalassays．TheseresultsprovedthatCSFV E2 interactedwiht RACK 1． Keywords：classicalswinefevervirus；porcinealveolra macrophage expression library；yeast-t·wo--hybrid；E2protein； RACK1：niteraction 猪瘟(Classicalswinefever，CSF)是 由CSF病毒 作用的宿主蛋 白可以为进一步研究CSFV的新型受 (CSFV)引起猪的一种高度传染性、致死性传染病。 体以及揭示病毒感染的分子机制奠定基础 。 E2蛋 白是CSFV中诱导机体产生 中和抗体的主要抗 本研究利用构建的猪肺泡巨噬细胞(PAM)酵母 原，因此为 CSFV新型疫苗研究的主要抗原。E2蛋 表达