转基因及常规水稻穗期对潮霉素的敏感性.pdfVIP

渺孝J-：种学 2012年第3期 圜 文献著录格式：李友发，富昊伟 ，陆强．转基因及常规水稻穗期对潮霉素的敏感性 [J]．浙江农业科学，2012 (3)：273—275 转基因及常规水稻穗期对潮霉素的敏感性 李友发 ，富昊伟，陆 强 (浙江省嘉兴市农业科学研究院，浙江 嘉兴 314016) 摘 要 ：研究带潮霉素磷酸转移酶基 因的转基 因水稻及常规水稻穗期施用潮霉素 B溶液后 的反应 。结果发 现 ，常规水稻在穗苞期注射 5O，75，100mg·L 潮霉素 B溶液后 ，注射穗抽穗后分别 出现 26．3％，27．9％， 32．7％的枯死穗粒 ，且分别有 5％，15％，20％的穗苞枯死株 ，抽穗期喷施 50，75，100mg·LI1潮霉素 B溶液 后 ，穗部毒性症状表现为颖壳黄褐色，黄褐色颖壳穗粒分别为 9．70％，14．6％，16．2％；而带潮霉素磷酸转移 酶基 因 (hpt) 的 转基因稻均未出现上述毒性症状 。 关键词 ：水稻 ；潮霉素 ；敏感性 ；潮霉素磷酸转移酶基因 (hpt)；无标记基因转基 因植物 中图分类号 ：S5l1 文献标志码 ：A 文章编号 ：0528—9017(2012)03—0273—03 潮霉素 B是一种氨基糖苷类抗生素 ，可破坏 转基因 “三 系”籼稻恢复系，R28系嘉兴市农科 细胞中核糖体的功能。水稻中潮霉素通过单键细胞 院育成的常规籼稻恢复系 ，不带 基因。 叶绿体和线粒体 中的核糖体与延长因子 EF．2的结 试验用潮霉素B为 Roche公司产品，用清水配 合位点 ，从而抑制肽链的延长，破坏细胞功能，使 成50，75，100mg·L 3种浓度水溶液。注射方 敏感组织褐化死亡而呈现毒性症状。潮霉素磷酸转 法为 ：各处理选择克螟稻 R1号与 R28各 20株 ， 移酶基 因 (hpt)导入水稻后 ，使细胞具有了潮霉 当主穗处于幼穗分化八期 (穗将伸而未破苞见穗 素磷酸转移酶 (HPT)活性 ，从而可忍耐较高浓度 阶段)时 ，用 医用小针头将上述浓度 的潮霉素溶 的潮霉素毒性 ，因此，在水稻转基 因育种 中，hpt 液注入穗苞 ，每个穗苞约注入 0．5～1．0mL。植株 基因已成为最有效 的选择基因之一 。先期通过农杆 抽穗后 ，观察稻穗的中毒症状并统计 中毒穗粒数 。 菌介导法转育的 克螟稻都携带潮霉素抗性基 因 喷施方法为 ：各处理群体 4O株，喷施 时期为始穗 Hyg，在商业化生产竞争 中处于不利地位 。在尝试 期一齐穗期 ，此时所有植株主穗已抽出，最迟分蘖 通过诱变或遗传学手段将 Hyg基 因与 基 因分离 尚未抽 ，有较多中间穗正在抽穗过程中。用手持小 的研究中，对群体 中潮霉素敏感植株的快速 、有效 喷雾器将潮霉素溶液均匀充分地喷施到穗层。植株 的筛选方法至关重要。有关潮霉素的处理效果除对 完全抽穗后 ，观察主穗的中毒症状并统计主穗的总 浸种催芽 ¨或离体叶片 有简短报道外，也 曾有 粒数和有中毒症状 的穗粒数。 用潮霉素处理水稻活体 的幼苗的报道 J。在实际 2 结果与分析 应用中，我们发现水稻幼苗鉴别虽然有效 ，但仍存 在较多干扰因素 ，特别是在应用于诱变群体中低频 2．1 中毒症状 率的突变株筛选时，幼苗期的观察效果不够直观。 试验中，克螟稻 R1号无论注射还是喷施 ，稻 本研究中我们探索了水稻潮霉素敏感型在穗期的鉴 穗均没有出现中毒症状 ，表现对潮霉素有很好的抗 定方法 ，并对其在大群体筛选试验中的应用效果进 性。而 R28则表现出不同程度 的穗中毒症状。R28 行 了研究。