水稻新型核转化筛选标记基因的鉴定及应用.pdfVIP

中国科技论文在线 水稻新型核转化筛选标记基因的鉴定及 应用# 张娟娟，周菲** 5 （华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉 430070） 摘要：筛选标记基因在植物基因工程中起着重要的作用，目前多为抗生素抗性基因或抗除草 剂基因，但基于生物安全性和可用筛选标记有限性等方面的考虑，新型筛选标记基因的利用 势在必行。D-氨基酸筛选体系，利用的是 D-氨基酸，其具有普遍可用、价格便宜、且对动 物和微生物相对无毒等多种优越性。基于此原因，本研究将人工合成的来自 Escherichia coli 10 的 dsdA 基因与来自 Schizosaccharomyces pombe 的 dao1 基因，通过农杆菌侵染方式转化到 水稻中花 11 中。对转化株进行分子生物学检测表明，目的基因整合到了水稻核基因组中， 其中获得转化 dsdA 的单拷贝植株 7 个，转化 dao1 的单拷贝植株 6 个。通过对单拷贝转基因 家系表达量检测及T0 代种子萌发测验发现，dao1 基因在 2 个（编号 6,7 ）转基因家系中表达 量显著，T0 代种子在含 D-Ala 的培养基上，具有明显抗性。dsdA 基因在所有的转基因家系 15 中表达量相对偏低，在含 D-Ser 的培养基上，T0 代种子有一定抗性。该研究初步探索了 dsdA、 dao1 两个新型筛选标记基因在水稻核转化中的应用，为以后它们得到广泛应用奠定基础。 关键词：基因工程；水稻；筛选标记基因；D-氨基酸 ；生物安全 中图分类号：S 511．503；Q 343 ．1+2 20 Identification and application of new selectable marker genes for rice (Oryza sativa L.) nuclear transformation ZHANG Juanjuan, ZHOU Fei (National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement, Huazhong Agricultural University, WuHan 430070) 25 Abstract: Selection marker genes are widely used for the plant transformation. In most cases, selection is based on antibiotic or herbicide resistance. Due to the public biosafety consideration and the limited availability of selection marker, it is obviously necessary to explore new selectable marker genes and selection markers. The screening system of dsdA (dao1) /D- amino acid has various advantages, as in t