2, 3-丁二醇发酵液的絮凝除菌与絮凝细胞的循环利用.pdfVIP

第 8 卷第 4 期 过 程 工 程 学 报 Vol.8 No.4 2008 年 8 月 The Chinese Journal of Process Engineering Aug. 2008 2,3-丁二醇发酵液的絮凝除菌与絮凝细胞的循环利用 张江红， 孙丽慧， 修志龙 (大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系，辽宁 大连 116024) 摘 要：研究了用壳聚糖/海藻酸钠复合絮凝剂处理 2,3-丁二醇发酵液的工艺条件，以絮凝率为指标，考察了壳聚糖分 子量、壳聚糖用量、海藻酸钠助凝剂用量、发酵液 pH 值、搅拌时间等因素对处理效果的影响，确定了适于 2,3-丁二 醇发酵液体系的絮凝工艺. 结果表明，最佳操作条件为壳聚糖分子量 40 kDa ，壳聚糖用量 0.375 g/L，海藻酸钠助凝剂 用量 0.250 g/L，发酵液pH 5.0 ，搅拌时间 30 min，静置 1 h. 该条件下，絮凝率可达 98% 以上，2,3-丁二醇保留率约为 99%，且絮凝后上清液清澈、透明. 絮凝后的菌体可再次利用，发酵过程中菌体最高浓度(OD 值)可达 13.5，其转化能 力与絮凝前相当. 关键词：2,3-丁二醇；絮凝；壳聚糖；发酵 中图分类号：Q815 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2008)04−0779−05 1 前 言 值、搅拌时间等因素对 2,3-BD 发酵液絮凝效果的影响， 2,3-丁二醇(2,3-Butanediol, 2,3-BD)是一种重要的化 在实验室条件下初步确定了絮凝的最佳工艺条件，为其 工原料和液体燃料，广泛应用于化工、食品、燃料以及 工业化应用打下了基础. 并通过絮凝细胞的再发酵实 航空航天等领域[1,2]. 目前其生产方法主要是生物转化 验，验证了絮凝后的菌体可再次利用，从而省略了种子 法，即以可再生资源为原料，通过微生物代谢将单糖转 培养、接种步骤，简化了发酵工艺. 化为目标产物. 但发酵液中产物 2,3-BD 的有效提纯一 2 实 验 直是阻碍其大规模工业化生产的重要因素之一. 工业上 采用的分离方法多为高速离心法或微孔膜过滤法. 用高 2.1 实验材料与仪器 速离心法处理发酵液，设备投入成本高、能耗大；采用 菌种为 Klebsiella pneumoniae CICC 10011 ，种子培 膜过滤法存在膜污染严重、清洗困难、成本高等缺点. 絮 养基和发酵培养基见文献[8]. 2,3-BD 发酵液是本实验室 凝技术由于具有低成本、操作简单、能提高固液分离速 以葡萄糖为底物发酵所得，发酵液OD 值(A650)12.3 ，pH 度和液体澄清度等一系列特点，逐渐成为微生物产品分 5.5，2,3-BD 浓度 57 g/L，葡萄糖浓度 57 g/L. 本实验使 离研究的热点[3,4] ，在甘油发酵液、透明质酸发酵液、乳 用的絮凝剂为壳聚糖(脱乙酰度大于 85%，分子量 6∼140 [5] [6] 酸发酵液 、赖氨酸发酵液、1,3-丙二醇发酵液 等的预 kDa) ，助凝剂为海藻酸钠，均为市售工业级产品. 主要 处理上有很多成功报道，如鲁诗峰等[6]采用壳聚糖絮凝 仪器：721 分光光度计，磁力搅拌器，恒温水浴锅，pH 1,3-丙二醇发酵液菌体，取得了显著效果，发酵液的菌 电极，5 L 自控发酵罐(BIOTECH-5BG，上海保兴生物 体和蛋白质去除率分别可达 99.97%和 91.56%. 但在处