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第 27卷第 1期 佛 山科学技术学院学报 (自然科学版) Vo1.27NO.1
2009年 1月 JournalofFoshanUniversity (NaturalScienceEdition) Jan.2009
文章编号 :1008—0171(2009)01-0086—03
脱氧核糖核酸 (DNA)提取与成分鉴定实验的改进
翁 闪凡
(佛山科学技术学院 检验药学系。广东 佛 山528000)
摘要 :目的 针对医学院校生物化学课所开设的脱氧核糖核酸 DNA的提取与成分鉴定原实验方法 中.学生实
验结果不太理想而进行实验改进 。方法 采用不 同氯化钠浓度 比差别法来抽提 DNA蛋 白;用SDS处理后再用
氯仿一异戊醇抽提除去蛋 白质 .加入 乙醇脱水析 出DNA。用化学显色法作DNA成分鉴定 。结果 实验经过改进
后效果理想 .实验结果观察现象明显.学生实验成功率提高,实验成本 降低。
关键词 :DNA 提取 ;鉴定 ;实验;改进
中 图分类号 :Q523 文献标识码 :A
从 2000年开始开设 DNA 的提取与成分鉴定实验 ,按照医学院校传统 的操作方法进行实验 ,学生
的实验过程与结果都不理想 ,每次实验都会有一大部分的学生实验失败,而且离心过程 中离心机损坏与
离心管破裂现象严重。笔者总结多年来的实验教学经验 ,对实验积极进行探索 。通过将有关操作步骤的
方法和标本制备、标本用量、实验条件等做了适当的改进后 ,可以得到满意的实验效果。
l 实验材料与方法
1.1 材料
实验标本用实验专用兔肝匀浆或猪肝匀浆 。
1.2 仪器
DS一1型组织捣碎机 (上海标本模型厂),TDI802B台式离心机 (上海安亭科学仪器厂),600一B数显
水浴锅 (姜堰市新康 医疗器械厂)。
1.3 实验方法
采用在 SSC液中离心纯化分离细胞核;用不同氯化钠浓度比差别法来抽提 DNA蛋 白;用 SDS处
理后再用氯仿一异戊醇抽提除去蛋 白质 ,加入乙醇脱水析出DNA。DNA成分中磷酸鉴定利用磷酸能与
钼酸铵作用产生磷钼酸 ,后者在维生素 C作用下形成蓝色的钼蓝;嘌呤碱鉴定利用嘌呤碱能与硝酸银
产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物;脱氧核糖鉴定利用脱氧核糖在浓酸中生成Ⅲ一羟基r一酮基戊醛 ,它和
二苯胺作用生成蓝色化合物 。
2 实验改进措施
2.1 实验标本肝匀浆制备的改进方法
1只兔肝加入70~80mI2SSC液,用DS一1型组织捣碎机捣碎 5rain后再用双层纱布过滤得肝匀
浆滤液。
收稿 日期 :2008—1卜20
作者简介 :翁闪凡(1975一),女.广东佛 山人 .佛 山科学技术学院实验师 。
第 1期 翁 闪凡 :脱氧核糖核酸(DNA)提取与成分鉴定实验 的改进 87
2.2 学生实验操作步骤中改进的方法和补充的实验条件
1‘)标本用量为 6mI。
(2)加入二倍体积 9 乙醇后用旋转法作顺时针摇动三角烧瓶至见成团DNA析 出_3:。
(3)25 SDS液用十二烷基硫酸钠配制 。按实验操作规程加入此试剂后用玻棒搅拌充分混匀。
(4)嘌呤碱的鉴定作结果观察时需补充的实验条件:在充足太阳光下变灰褐色甚至紫褐色;用沸水
加热 5min后变灰褐色。
(j)磷酸的鉴定作结果观察时需补充的实验条件 :用沸水加热 5min后变蓝色 。
(6)脱氧核糖的鉴定作结果观察时需补充的实验条件 :用沸水加热 5min后变蓝色 。
3 实验改进前后效果的比较
我校从 2000年临床医学本科班开设本实验项 目起,01、02、o3级临床医学本科班完全按实验指导
来进行实验试剂的配制和实验方法操作 ,称为原实验组 。o4、Oj、O6、07级临床 医学班按改进后的方法来
进行实验试剂的配制和操作,称为改进实验组 。现将两个实验组的实验全过程比较如下,见表 1。
表 1 实验 改进前后 比较分析
4 讨论
4.1 实验改进措施的分析
(1)通过标本制备方法的改进 ,减少 2SSC液的加入量 ,增加肝匀浆的粘稠度。使标本用量从 9mI
减为 6mI.方
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