酶联免疫法测定猪组织链霉素残留量的探讨.pdfVIP

18 福建畜牧兽医 第35卷 第3期 2013年 酶联免疫法测定猪肉组织链霉素残留量的探讨 戴晓丽 柯 璐1 2 （1.福建出入境检验检疫局 福州 350003；2.福建农林大学动物科学学院 福州 350002） 摘 要 对酶联免疫检测法检测猪肉中的链霉素残留展开研究，主要进行线性、检测限、准确度灵敏度和特异性等方面的试验。 结果表明该方法可满足国家农业部与欧盟的要求，可用于链霉素残留初筛检测。 关键词 链霉素 猪肉 酶联免疫法 文献标识码：A 文章编号：1003-4331(2013)03-0018-03 链霉素是一种氨基葡萄糖型抗生素，分子式 2 试验原理 C H NO ，用于革兰氏阴性菌和结核杆菌感染的治 链霉素 EIA微孔板用绵羊抗兔抗体 IgG包被。 21 39 7 12 疗。在家畜感染性疾病的防治中发挥了重要作用，但 特异性抗体 （兔抗链霉素）、辣根过氧化物酶标记的 其毒副作用较大，链霉素对听觉神经毒性较大，长期 链霉素（酶结合物）和链霉素标准品或样品被加入到 使用可对人体肾脏和听神经造成不可逆转的损害， 微孔后，特异性抗体被牢固地结合在板条上的羊抗 ［1-2］ 长期使用还会使细菌产生耐药性 。 兔抗体 IgG上，同时，游离的链霉素和酶结合物与特 为了保障动物源性食品的安全，2377/90/EEC 异性抗体竞争性结合。未结合的试剂在洗涤过程中 (703/2007修订)规定动物性食品肌肉、脂肪、肝脏中 被除去，然后加入底物显色，在 450 nm波长下检测 链霉素最大残留限量（MRL）为 500 ug/kg，肾脏中为 吸光度，吸光度值与链霉素浓度成反比。 1000 ug/kg，乳中为 200 ug/kg［3］ 。目前链霉素残留 3 检测步骤 的检测方法主要包括微生物法、免疫学法、液相色谱 3.1 样品前处理 称取 1g均质猪肉组织到干净的 法、质谱法、毛细管电泳法等［4-5］。因此，快速灵敏的 试管中，加入 6 mL 的 3%的三氯乙酸，盖上塞子，颠 检测技术是非常需要的，但目前广泛使用的仪器法 倒混匀样品 30min，2 000 g 4 益离心 10min；除去 检测存在成本高、操作复杂、试验周期长的问题，难 上层脂肪，用过滤管吸取 150uL清液 （避免吸入脂 以适应大批量快速检测，而酶联免疫法具有特异性 肪）于塑料试管中，加入 950 uL SDB后，混匀；调整 强、灵敏度高、快速等优点，适应大批量检测需求，本 pH至 7.4依0.4；吸取 50 uL用于检测 （相当于 0.02 g 试验运用酶联免疫法检测猪肉组织中链霉素残留检 组织/mL）。SDB：1.15g Na2HPO，0.2 g KHPO，0.2 g4 2 4 测，从准确性、灵敏度、稳定性、交叉反应等方面探讨 KCl，30g NaCl，0.5 mLTween80 (pH7.4) 定溶于 1L 其能否满足检测需求。 蒸馏水中。 1 试剂与材料 3.2 检测步骤 吸取 100uL0 ug/kg浓度的标准品 1.1 主要试剂 链霉素、双氢链霉素、新霉素、卡 于孔 A1、A2，吸取 50uL各浓度的标准品或样品稀 那霉素、托普霉素、氨基羟丁基卡那霉素、庆大霉素、 释液于微孔中，做双孔平行；滴加 25uL酶结合物和 紫苏霉素标准品均购自 Sigma；三氯乙酸、NaHPO、 25 uL抗体溶液于除 A1和 A2