急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析 钱 瞡 王崇明 潘鲁青 黄 絰 中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室山东 青岛 中国水产科学研究院黄海水产研究所山东 青岛 摘要 根据急性病毒性坏死病毒 序列设计引物以 的 为模板进行扩增 引物酶 基因 同时构建表达质粒 并转化至 进行诱导表达 检测显示诱导表达两条蛋白条 带其中分子量为 的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致另一蛋白条带分子量约为 经 及质谱分析鉴定分子量 的蛋白条带为引物酶而表达 出的 蛋白条带存在部分引物酶多肽片段 结合荧光染料 在 内 荧光强度比较稳定从而确定 为进行 引物酶活性分析的最佳终止反应时间并 在引物合成实验中观察到 内引物酶活性较高 当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸 为模板时重组引物酶能特异性催化底物 可显著增强引物酶活性而 和 能抑制引物酶活性 关键词 引物酶 原核表达 核酸染料 酶学活性 多聚胞嘧啶寡核苷酸 中图分类号 文献标志码 急性病毒性坏死病毒 存在才能将添加的核苷酸连接到羟基 是导致山东半岛辽东半岛沿海养 上生物体存在 种方式解决这个问题 其中最 殖栉孔扇贝 大规模死亡的病原 普遍的机制是在生物体引物酶催化下 以单链 为双链 病毒且呈球形主要存在于扇贝外 为模板合成小段 引物为聚合酶提供合 套膜消化腺肠和肾脏细胞间质和结缔组织细胞 成 的 所有真核生物细菌和许多病 毒都是按这一策略解决 合成的起始问 中 根据任伟成等 的测序结果在 全基 因组 预测 的开放 阅读 框 题 目前研究的引物酶大致分为 类 中发现与 的 复制核 原核表达的引物酶与解旋酶结合 真核表 酸修饰与代谢及病毒与宿主相互作用相关的 达的引物酶与多聚酶结合 非细胞结构的引 有 个 其中 编码的引物酶基因 物酶 参与病毒 复制 病毒 的复 制 与 引物 酶 活 性 密 切 相 关 在 复制过程中 引物酶为依赖单链 等 发现肿瘤细胞中的 复制比 的 聚合酶而多聚胞嘧啶寡核苷酸 正常细胞的活跃同时肿瘤细胞中引物酶活性明 和多聚胸腺嘧啶寡核苷酸 就