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维普资讯 第6卷第 1期 生 物 加 工 过 程 Jan．2008 2008年 1月 ChineseJournalofBioprocessEngineering · 27 · argE基因在大肠杆菌中的表达优化 朱大伟，李 环 ，韦 萍 (南京工业大学 制药与生命科学学院，南京210009) 摘 要：N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶可在重组茵BL21(DE3)一pET22b—argE中表达。首先确定了该酶的细胞表达定位， 再研究了诱导温度、诱导剂种类及浓度、诱导起始茵体密度、诱导时间等因素对重组茵生长及 目的蛋白表达活性的 影响。结果表明，IPTG和乳糖皆可诱导 目的蛋 白表达，乳糖的诱导效果优于 IPTG。在诱导起始0D 为0．46时加 入 15g／L乳糖，20℃诱导 18h最适于 目的蛋白的活性表达。表达条件优化后，酶活从 1．68U／mL提高至282．99 U／mL，约为原来的 168倍 。 关键词：argE基因；表达；诱导剂；优化 中图分类号：Q55 文献标识码：A 文章编号 ：1672—3678(2008)01—0027—05 Optimization oftheexpression ofargE geneinE．coli ZHU Da—wei，LIHuan，WEIPing (CollegeofLifeScienceandPharmaceuticalEngineering，NanjingUniversityofTechnology，Nanjing210009，China) Abstract：N-acetylornithinedeacetylasewasexpressedinrecombinantbacteriaBL21(DE3)-pET22b- argE．Thelocationofthetargetproteinwasdetermined．Theeffectsofinductiontemperature，typeofin- ducerconcentrationofinducer，initialcelldensity，inductiontimeontheactivityexpressionofthetarget proteinwerestudied．TheresultsshowedthatbothIPTG andlactosecouldbeinducers，andtheinduction effectoflactosewasbetterthanthatofIPTG．Withtheoptimizedactiveinducingconditionofadding15 LlactoseatinitiatedDD600of0．46 andcuhivating for18hat20 ℃ ，theNAOaseactivitywasin- creasedby168foldsfrom initial1．68U／mLto182．99U／mL． Keywords：argE gene；expression；inducer；optimization 氨基酰化酶(aminoacylase，EC3．5．1．14)为十 大肠杆菌 argE编码的Ⅳ_乙酰鸟氨酸脱酰基酶 大常用酶系之一，主要用于氨基酸的立体拆分，常 (N-acetylornithinedeacetylase，简称 NAOase；EC3．5． 见来源为猪 肾及米 曲霉。猪 肾中的酰化酶提取过 1．16)同样具有立体拆分氨基酸的功能，且具有广泛 程复杂，酶含量及活力较低 ，且来源受到较大限制。 的底物特异性 J，但和氨基酰化酶相 比，对该酶的