A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制.pdfVIP

维普资讯 344 中国公共卫生 2008年 3月第 24卷第 3期 ChinJPublicHealthMar2008Vo1．24No．3 文章编号 ：1001—0580(2008103—0344—03 中图分类号：R378．15 文献标志码 ：A 实【验研究】 A群脑膜炎奈瑟菌多糖 IgG抗体检测试剂研制 肖丽君 ，赵恩宏 ，孔健。，郝志敏 摘 要：目的 研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖 IgG抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂。方法 以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖 (MenAPS)，将多糖与卵清蛋 白(EA)以还原氨基法 偶联，并以SepharoseCL一4B纯化。优化反应条件，建立 以偶联物MenAPS—EA为包被抗原检测 A群脑膜炎奈瑟菌 多糖 IgG抗体的间接 ELISA法，并与血清杀菌力试验 (SBA)比较。结果 高效液相色谱检测MenAPS—EA结合物 纯度为81．5O％。试剂具有 良好重复性 (变异系数CV=4．26％～5．3O％)；37℃放置7d、4C放置 12个月。试剂的灵敏 度不变，具有优 良的稳定性；分别用该试剂和 SBA法检测 192份血清，试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为 96．91％，特异度为9O．00％，一致性为 95．83％，统计学分析表明，2种检测方法之间差异无统计学意义。结论 以纯 化 MenAPS—EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性 IgG抗体间接 ELISA检测试剂具有可行性，为 进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。 关键词：酶联免疫吸附试验(ELISA)；偶联物；抗 A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖 IgG抗体 Developmentand application ofanELISA kitfordetectinghuman anti——acpsularpolysaccharidesIgG ofserogroup A meningococcus XM0Liqun，ZHA0En—hong，KONGjian，eta1．ChengdeMedicalCollege(Chengde067000，China) Abstract：0bjective DevelopmentandapplicationofanELISAkitfordetectinghumananti——capsularpolysaccharides antibodyofserogroupAmenlngococcus．Methods Thecapsularpolysaccharide(MenAPS)waspurifiedfrom thesuper— natantbyCTAB，phenol，andethanolprecipitation．MenAPSwas coniugatedwitheggalbumin (EA)byreductiveamina— tion，andpurifiedbySepharoseCL一4B．W eoptimizedthereactionconditions，developedtheindirectELISA methodforthe detectionofhumananti—serogroupA meningococcuspolysaccharideIgG whichwiththepurifide M enA PS—EA as coating antigen．Thekitwascompraedwi thSBA ．Results ThepurityofMenAPS—EA was 81．50％ byhigh—performanceliquid chromatography(HPLC)．Thediagnostickitwas assessedbyaseriesofassays，theesnsitivityandspecificityandrepro— ducibility(CVofpositivequanlityocntrols