应用酵母双杂交系统筛选新基因Collectrin相关蛋白.pdfVIP

应用酵母双杂交系统筛选新基因Collectrin相关蛋白.pdf

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维普资讯 ISSN 1007.7626 中国生物化学与分子生物学报 2005年4月 CN 11-3870/Q ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiol 2l(2):180~184 — — 应用酵母双杂交系统筛选新基因 Collectrin相关蛋 白 张 宏 , 张艳玲,梁秀彬,侯 平, 王海燕 (北京大学第一医院肾内科 ,北京大学 肾脏病研究所 ,北京 100034) 摘要 Collectrin是在小鼠5/6肾切除后 ,在 肾小球 的高滤过 、高增生期分离克隆的一个新基 因.通 过酵母双杂交系统从人 肾脏 cDNA文库 中筛选与 collectrin相互作用的蛋 白,可 以为该基 因的功能 研究提供线索.构建 collectrin的真核表达载体 collectrin.pGBKT7/C-myc,转化酵母菌AH109.Western 印迹证实,collectrin蛋 白能够在酵母 中正常表达 ,对酵母 细胞无毒性,不存在 自激活现 象.将 AH109/c0llectrin-pGBKT7/c—myc与转化 了成人 肾脏 cDNA文库的酵母菌 Y187接合 ,共筛选到 5个与 细胞代谢有关的蛋 白,包括鞘磷脂激 活蛋 白、精氨琥珀酸合成酶、氨基酸转运蛋 白XAT2、NADH脱 氢酶 1和金属硫蛋 白2A.由此推论 ,collectrin可能通过与细胞 内某些酶类相互作用而影响细胞代 谢 ,为新基 因collectrin的功能研 究提供 了重要线索 . 关键词 collectrin,酵母双杂交系统,蛋 白间相互作用 中图分类号 Q75,Q25 ScreeningforProteinsInteractingwiUlNovelGeneCollectrin inAdultHumanKidneycDNA LibrarybyYeastTwoHybridSystem ZHANG Hong ,ZHANG Yan—Ling,LIANG Xiu-Bin,HOU Ping,WANG Hai—Yan (DivisionofNephrology,,mm眦eofNephrology,FirstHospital,PekingUniversity,Beifing 100034,China) Abstract A novel kidney specific gene collectrin.was recently identified in 5/6 ablated kidneys at hypertrophicphase.To screen for proteins interacting with collectrin. the yeasttwo—hybrid system was performed. eintracellulardomainofcollectrinwasfusedtoaDNA.bindingdomainas “Bait”andtheyeast strainAH109wastransformedwith collectrin.pGBK1_7/C—myc.Western blotanalysisrevealed thatcollectrin proteinwasexpressednormallyandthereWas noself-activationandtoxicityonyeaststrainAH109. enthe AH

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