湖北侧褶蛙与黑斑侧褶蛙同工酶的比较研究.pdfVIP

维普资讯 第24卷 湖北师范学院学报(自然科学版) Vok24 第4期 JournalofHubeiNormalUniversity(NaturalScience) No．4，2004 湖北侧褶蛙与黑斑侧褶蛙同工酶的比较研究 殷文莉 ，戴建华 (1．南京林业大学 森林资源与环境学院，江苏 南京 210037； 2．南京师范大学 生命科学学院，江苏 南京 210097) 摘要 ：采用垂直板聚丙烯、酰胺凝胶电泳方法，对湖北侧褶蛙 (Pelophylaxhubeiertsisi)和黑斑侧褶蛙 (Pelophy- laxnigromaculata)的消化道、心脏 、肌 肉、脾脏 、肾脏、脑、肝脏、生殖腺、晶体和肺等 1O种组织 中的酯酶 (EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乙醇脱氢酶 (ADH)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物酶(POX)等 5种 同工酶 进行 了比较研究。分析并讨论 了5种 同工酶在不同组织中的分布及遗传基础。结果显示。两种蛙的POX、 MDH、ADH同工酶表现 明显的遗传相似性；EST、LDH 同工酶存在较大的种 间差异。 关键词 ：湖北侧褶蛙 ；黑斑侧褶蛙；同工酶 ；电泳 中图分类号：Q956 文献标识码：A 文章编号：1009-2714(2004)04．0013-04 自从Market和Moiler…1957年首次提出同工酶概念之后，随着同工酶分离技术的进步，同工酶 技术很快就成为分子水平上研究生物现象的一种重要手段。同工酶的研究是从基因产物认识基因存 在及其表达，由生化表现型反映基因型，将宏观遗传现象结合到微观分子水平，对分子遗传学有极其 重要意义。近年来 ，对同工酶的研究已应用到种群遗传 、系统进化、杂交育种、病理生理以及环境保护 等方面 ，引。 本文通过对湖北侧褶蛙和黑斑侧褶蛙5种同工酶的电泳分析 ，根据两种蛙同工酶的异 同性及基 因表达的特点探讨了其遗传基础及亲缘关系，为这两种蛙的种质资源的研究提供有意义的资料。 1 材料与方法 1．1 材料 湖北侧褶蛙 、黑斑侧褶蛙购 自黄石港集贸市场。 1．2 方法 1．2．1 样品制备 活体解剖，取消化道、心脏、肌肉、脾脏、肾脏、脑、肝脏、生殖腺、晶体和肺等 lO种 组织 ，用蒸馏水漂洗 ，按 1：2(重量 (g)：体积 (mL))加重蒸水冰浴匀浆，40~C 、15000rpm离心45min。 吸取上清液，1：1加入40％甘油混匀，置低温冰箱保存备用。 1．2．2 垂直平板聚丙烯酰胺凝胶 电泳 凝胶浓度为 7．5％，交联度 2．5％。电泳原理与方法参见 H s[ 。 1．2．3 同工酶染色方法 参见Harrisl，Sieilianol及Browerj。 1．2．4 同工酶电泳酶谱分析 酶谱分析和命名参见熊全沫 】。以1，2…… 表示 向阳极迁移位 点，愈靠近阳极的位点以数 目愈小的数字表示，如 EST一1、EST一2等 ；以A，B……表示编码酶带的 [收稿 日期] 2004一o6—28 [基金项 目] 湖北省 自然科学基金项 目(97J049) 【作者简介】 殷文莉(1966一 )，女，湖北黄石人，硕士，副教授，主要从事动物分子遗传学研究。 · 13 · 维普资讯 等位基因，愈靠近阳极的等位基因以愈前面的字母表示 ，例如 ：EST一1A、EST一1B等。 2 实验结果 2．1 乳酸脱氢酶 (LDH1．1．1．27)同工酶比较 两种蛙 LDH同工酶为四聚体 ，由1个位点控制 ，由A、B两个等位基因编码。黑斑侧褶蛙的消化 道、肾脏、脑 、肝脏 、生殖腺、晶体及肺等各种组织中具有由A、B编码的A 、 B、A2B AB。及 B5 条酶带 ，心脏具有 A 、AB 、A：B 及 AB4条酶带，脾脏具有 A 、AB、B 3条酶带 ，肌肉具有 A 、 AB，2条酶带。湖北侧褶蛙的消化道、脾脏 、肝脏 、生殖腺具有A 、AB、AB 及 B4条酶带，