用DNA指纹技术分析Z：ZCLA长爪沙鼠的遗传质量.pdfVIP

维普资讯 卜海实验动物科学 ShanghaiLaboratoryAnimalScience 39 用DNA指纹技术分析Z：ZCLA长爪沙鼠的遗传质量 萨晓婴， 刘月环， 刘迪丈 (浙江省实验动物中心，浙江省实验动物与安全性研究重点实验室，杭州310013) [摘要]目的 探讨清洁级z：ZCLA长爪沙鼠遗传组成和遗传质量。方法 用重组33．6小卫星探 针对清洁级z：ZCLA长爪沙鼠核心群的20个个体进行Southernblotting检测。结果 在7～15 kb的分子范围内，该品系所有个体产生5～6务分子杂交条带；其中在8～9kb位置上，某些个 体的分子标记呈多态性变化，其余位置的标记无多态性，经统计，该品系核心群的个体间相似系数 约为0．95。结论 该群体的多态性不够高，可能与因群体样本含量较小有关。 [关键词]z：ZCLA长爪沙鼠： DNA指纹； 遗传质量； 小卫星 [中图分类号]Q95-33 [文献标识码]B [文章编号]1004-8448 (2005)0卜0039—02 长爪沙鼠具有多项自发性疾病模型特征，是 (Spanish产)：Hybound—N+尼龙膜、pSPT19．6质 心脑血管、神经药理学、糖尿病、病毒学、寄生虫 粒、ECL核酸标记和检测试剂盒 (Pharmacia公司 学、行为学!等研究领域常刚的实验动物…。z：ZCLA 产)：X光胶片 (Kodak公司产)。 长爪沙鼠是浙江省实验动物中心经过20余年培育的 1．3 方法[3] 封闭群品系[2]，近年来通过生物净化，所携带的 1．3．1 基因组DNA的提取 DNA提取试剂盒， 微生物得剑控制。 提取沙鼠肾脏L}JDNA基冈组。 实验动物的遗传质最及遗传组成，关系动物 I．3．2 酶切、电泳及转膜 刚限制性内切酶HinfI 实验结果的准确性，可作为育种及动物实验设计和 消化DNA：对样品进行琼脂糖凝胶电泳，电压50V， 选择时的参考。本文将利}}jDNA指纹技术，对Z：ZCLA 时问24h：通过印迹转移，将凝胶上的DNA片段，转 长爪沙鼠的遗传质 进行检测，现报道如下。 移到尼龙膜上，经80℃烤膜20min，固定DNA。 1．3．3 探针扩增、提取及标记 将重组33．6小 1材料与方法 星探针的pSPTI9．6质粒，转入E 0_，(DH52和HB101 菌株)中扩增。然后}}j质粒提取试剂盒，从Ecoli 1．1 实验动物 中提取该质粒，并刚EcoRI和HindIII限制性内切 清洁级Z：ZCLA长爪沙鼠系浙江省实验动物中 酶酶切质粒。在低融点琼脂糖凝胶中电泳分离33．6 心培育的品系。 小 星探针，用凝胶回收试剂盒纯化回收探针。再 1．2 仪器及试剂 用ECL3000核酸标记试剂盒，标记该探针。 POWER／PeA 1000型电泳仪 (B10RAD公司 1．3．4 Southern杂交、显色 标记探针与尼龙 产)：TurboB1otter快速向 卜转移系统 膜上的小卫星DNA片段，进行分子杂交，刚ECL3000 (Schleicher ＆ Schuel1公司产)：SHAKE N‘’ 核酸检测试剂盒，使杂交带产生化学发光，刚x光 STACK型杂交炉 (Hybaid公司产)：DNA提取试剂 胶片对其曝光显色。 盒、质粒DNA提取试剂盒、凝胶DNA同收试剂盒 1．3．5 相似系数 计算品系内个体问的遗传相似 及限制性内切酶 (上海生T生物公司产)：琼脂糖 系数F=2NAB／(NA+NB)(NAB是个体A和B所共