碱性脂肪酶催化合成丙酸乙酯的研究.pdfVIP

维普资讯 第22卷第6期 泉州师范学院学报(自然科学) Vo1．22 No．6 2004年 I1月 JournalofQuanzhouNormalUniversity(NaturalScience) Nov．2004 碱性脂肪酶催化合成丙酸乙酯的研究 葛清秀 ，陈建平 ，黄祖新 ，吴政声 (i．泉州师范学院生物系福建 泉州 362000；2．福建师范大学生物工程学院福建 福州 350007) 摘 要：用扩展青霉碱性脂肪酶在有机溶剂中生物转化合成丙酸乙酯．探讨了不同有机溶剂、 加酶量、反应温度和反应时间等因素对丙酸转化率的影响．研究表明，当丙酸浓度为0．2otol／L、 丙酸和乙醇的摩尔比为1：1．25、摇床转速为 150r／rain、定时加入一定量的3A分子筛适当移走 产物的水分时：最佳溶剂为正辛烷(正庚烷次之)；最佳反应温度范围为32～36℃；当酶A的加入 量为0．35g／瓶(相当于 1100u／g丙酸)、反应时间为48h时，丙酸的转化率达 75．7 ． 关键词：碱性脂肪酶；丙酸乙酯；正辛烷；正庚烷 中图分类号：Q814 文献标识码：A 文章编号：1009—8224(2004l06--0098—04 丙酸乙酯又称初油酸乙酯，为无色液体，有类似菠萝和朗姆酒的香味，有类似甜酒的甜醚 香味和水果甜味．丙酸乙酯主要用于调合苹果香、香蕉香、李子香、奶油香以及黄油、西洋酒和 其他多种食用香精，还可用作高级日用化妆品香精、配制烟用香精和花香香精等．在制造纤维 素醚、酯时用作溶剂，也是多种天然树脂、合成树脂的溶剂．另外，丙酸乙酯还用作有机合成中 间体，用于生产乙胺嘧啶．目前丙酸乙酯产品(含食品级产品)基本上都是通过传统的生产方 式在无机催化剂(如氯化氢或硫酸)存在条件下化学合成的方法获得的[1]．和化学合成法相 比，酶法生物合成的芳香酯不仅被认为是高质量的天然产品，而且具有反应条件温和、转化率 高、专一性好、易提取、易控制等优点，被看成是很有希望工业化的新途径L2J． 国产碱性脂肪酶是一种高活性的生物催化剂，现已广泛应用于医药、食品、饲料、洗涤剂 及其他轻、化工行业中，其效果已赶超国外同类产品，是发展前景广阔的工业酶制剂新品 种[3]．本文报道了用碱性脂肪酶生物转化合成丙酸乙酯的研究结果，考察了酶法合成丙酸乙 酯的各种影响因素，探讨并得出了适宜的酶催化反应条件． 1 材料与方法 I．I 碱性脂肪酶 碱性脂肪酶产 自扩展青霉碱性脂肪酶高产菌株PenicilliumexpansumFS1884一I，由福 收稿 日期：20o4—07-24 作者简介：葛清秀(1961一 )．女．江西丰城人，副教授．从事生物学研究． 基金项目：泉州市重点科技资助项目(z2oolo12)；福建师范大学横向合作项目(DH一262) 维普资讯 第6期 葛清秀等：碱性脂肪酶催化合成丙酸乙酯的研究 99 建师范大学生物工程学院微生物工程研究所提供． 1．2 化学试剂 橄榄油为化学纯，其它试剂均为分析纯．有机溶剂在使用前用3A分子筛作脱水处理． 1．3 仪器 DS一1型高速组织捣碎机，磁力搅拌器，电热恒温水浴锅，HQ45型恒温摇床，碱式滴定管等． 1．4 碱性脂肪酶酶活测定 采用NaOH中和滴定法．取两个 100ml三角瓶分别作为空白瓶和样品瓶，各加5．00ml 4 PVA(聚合度 1750+50)橄榄油乳化液和4．00mlpH9．2甘氨酸一氢氧化钠缓冲液，于 空白瓶中加入 15ml95 乙醇作为终止液，在 36℃恒温水浴中预热10min后，各加入 1．00 ml用缓冲液稀释至一定倍数的已充分溶解并搅拌均匀的待测酶液，立即混匀计时，在36℃ 恒温水浴中反应 10min后在样品瓶中立即补加 15ml95 乙醇终止液，取出后立即用 0．05 mol／LNaOH标准溶液滴定(以1酚酞为指示剂)．按下式计算酶活． 工一 (B—A)× ×50× ， 式中，工为样