稻曲病菌抗血清的制备及其应用初探.pdfVIP

维普资讯 植物病理学报 ACTA PHYT0PATH0L0GICA S1NICA 34(6)：558—560(2004) 稻曲病菌抗血清的制备及其应用初探 张君成 ，陈志谊 ，张炳欣。，刘永锋 ，陆 凡 (1江苏省农科院植保所 ，南京210014；广西大学农学院，南宁530005； 。浙江大学植物保护系，杭州 310029) Preliminarystudyonproductionandapplicationofantiserum against 【，fng，lodPnvirens ZHANG Jun—cheng’。，CHEN Zhi—yi ，ZHANGBingxin。，LIU Yong—feng ，LU Fan (PlantProtection Institute，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，Nanjing210014，China； AgriculturalCollege，GuangxiUniversity， Nanning530005，China；。DepartmentofPlantProtection，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China) 文章编号：0412-0914(2004)06—0558—03 电Ustiingioideavirens(Cooke)Takahashi 疫 学技 术试 剂：Freund完全 和 不完 全 佐 剂 侵染引起的稻曲病，已上升为我国水稻生产的主要 (Sigma)；TMB(四甲基联苯胺 ，上海丽珠东风生物 病害之一，其病原菌产生的毒素可危害人们的健 技术公司)；羊抗 兔HRP—IgG (华美生物工程公 康。虽然至今国内外已对稻曲病开展了较多的研 司)；96孔微孔板 (NUNC，Denmark)。 究，但对一些与防病控害有关的关键问题，如稻曲 1．2 方法 病菌的侵染位点与侵染过程，水稻生长季节，稻曲 病菌的厚垣孢子、子囊孢子和薄壁分生孢子在田间 1．2．1 抗血清的制备 将稻曲病菌菌株Uv5在 的分布与作用等问题，至今仍不清楚。免疫学技术 马铃薯蔗糖培养液中振荡培养所获得的菌丝吸干、 是探明这些问题的有效手段，然而，免疫学技术体 液氮研磨、PBS浸提、离心收集上清液，调整蛋白 系复杂，需要进行相关探索才能有效应用。本文对 质含量为 1mg／mL作为菌丝可溶性抗原SAM。用 稻曲病菌抗血清的制备方法以及检测稻曲病菌的 Freund佐剂将SAM 乳化，6次注射免疫雄性新西 适用ELISA体系进行了初步探究，为进一步在稻 兰 白兔，心脏穿刺采血，分离血清获得抗血清 As 曲病菌研究中应用免疫学技术提供参考。 SAM 。 1．2．2 抗血清的有效性测定 试验采用的非竞争 l 材料和方法 EIISA(间接式)程序参照Jamaux—Despreaux等 1．1材料 的方 法[】]，竞 争 ELISA (间接 式 )程 序 参 照 病原菌材料：稻曲病菌菌株Uv一5、稻瘟病菌菌 Plasencia等的非平衡反应方法 。采用这 2种 株 2002—97、稻恶苗病菌菌株 Gf4、稻纹枯病菌菌 EIISA 程序测定抗血清的特异性 ；采用非竞争 株 Rs一2，均为江苏省农科院植保所提供；稻粒黑粉 ElISA程序测定抗血清的效价和检测灵敏度。As— 病菌标样采 自江苏省农科院农场稻田。水稻幼穗材 SAM 的工作稀度为 1：2000，SAM 包被微孔板