活体蛋白质功能的光学分子成像新技术新方法.pdfVIP

国家重大科学研究计划(2011CB910400) 活体蛋白质功能的光学分子成像新技术新方法 2012 年8 月项目中期总结简报 以骆清铭教授为首席科学家，华中科技大学、华南师范大学、厦门大学、复旦 大学、中国科学院生物物理研究所五家单位参与的，国家重大科学研究计划“活体 蛋白质功能的光学分子成像新技术新方法研究”，严格按照项目任务书中的2011 年 和2012 年计划进行，已取得了一些突破性进展，展示了其在活体蛋白质功能研究中 的应用前景。共发表SCI 论文94 篇。其中，在Nature Communication 上发表文章1 篇，IF ≥ 5 文章31 篇，光学T2 期刊（Optics Letters ，Optics Express ）文章10 篇。 获得授权发明专利11 项，申请发明专利16 项。超额完成了计划任务书中的指标。 主要开展的研究内容如下： 在多分子事件快速并行检测的飞秒激光扫描显微成像方面，（1 ）发展了基于声 光偏转器（AOD ）的多光子激发三维快速随机扫描技术，建立了相应的成像系统， 在随机扫描速度达到100KHz 的同时，二维扫描视场增大4倍达到418418 μm ，轴向 扫描范围由36 µm扩展到180 µm； （2 ）发展了基于相关控制连续光谱的多光子显微 成像新方法，可同时高效率地激发三色荧光分子，同时由于脉冲宽度被线性压缩至 57.2 fs ，显著提升了多色双光子成像的质量；（3 ）建立了单个活细胞内双分子事件 的同步比率成像新方法，利用新建的mVenus/mKOκ FRET对构建了蛋白酪氨酸激酶 Src探针，与单荧光蛋白的氧化还原比率探针Grx1-roGFP2联用，获得了双生物分子 信号互不干扰的动态信息。在此基础上，利用荧光蛋白探针能在细胞内准确空间定 位的优势，同时转染四种荧光蛋白探针，在单个活细胞内进行了四分子事件的同步 比率光学成像研究; （4 ）应用活体显微光学成像技术，动态监测了肿瘤微环境中多 种免疫细胞的运动，并定量表征其运动参数与特性。（5 ）针对活体内远距离追踪细 胞的需要，开展了光纤内窥式双光子显微成像系统的研究，拟与多光子激发显微成 像系统配合使用，以期在病灶与免疫组织器官之间同步光学成像监测免疫细胞的运 动与迁移；（6 ）针对提升活体光学成像深度的需要，以皮肤和颅骨为研究对象发展 了相应光透明技术，解决了生物组织对光的强散射问题，突破了组织混浊特性对活 体光学成像的限制，使得成像深度和对比度大为提高；（7 ）进一步完善了跨层次多 尺度活体成像的新方法，明显提高了图像重建的准确性。 在基于高分辨光声成像的跨层次多尺度信息获取方面， （1 ）通过开展揭示声、 光等能量形式在组织蛋白质内传输、相互作用、能量转换与信号产生机理，研究光 能转换时辐射跃迁和非辐射跃迁过程中光声和荧光相应的数理模型，从而建立了光 - 1 - 国家重大科学研究计划(2011CB910400) 声、荧光互补成像的新光学成像原理，研究多模态成像的算法及跨层次信息整合方 法，开展了光声、荧光蛋白质分子成像实验；（2 ）建立了高分辨的新型活体多尺度 的光声成像系统，现实了活体不同尺度下变分辨率的显微成像。并对主频特性对应 分辨率和成像深度之间的关系，激发探测模式、成像空间分辨率、图像对比度、高 频探测特性、图像反演算法等系列的关键问题进行了理论及实验研究。 在分子探针与标记方法方面，研发能用于活体成像的高性能荧光分子探针、光声分 子探针、多色荧光成像试剂和荧光-光声双模成像探针；并深入开展了高性能近红外分子 探针的合成和改性、多色成像荧光成像试剂的设计和合成、荧光-磁共振双模切换分子探 针的合成、功能化荧光蛋白变体的设计和合成、新型量子点的合成和功能化改性、以及 靶向荧光新标记技术等方面的研究。此外，将一些新型荧光蛋白突变体等应用于蛋白功 能成像研究，并完成了“靶向荧光标记新技术” （第三、四年计划任务）的部分研究内容。 研究成果将为抗原提呈、T 细胞激活以及T 细胞跨内皮迁移等免疫应答过程中关键蛋白 质分子的光学标记提供技术支撑。 在免疫应答过程相关蛋白质功能研究的模型建立方面，（1 ）以线虫为模型，准 确追踪和记录到了自由运动的线虫体内特定荧光信号的变化。在细胞和模式动物秀 丽线虫上分别建立不同类型胞吞的