海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58+的+克隆、表达、纯化和鉴定.pdfVIP

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2017-09-11 发布于山东
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海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58+的+克隆、表达、纯化和鉴定.pdf

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32 2 ( ) Vol． 32 No． 2 第卷第期中南民族大学学报自然科学版 20 13 6 Journal of South-Central University for Nationalities (Nat． Sci． Edition) Jun． 20 13 年月海南斑等蝎钾通道阻断剂 Im58 的、、克隆表达纯化和鉴定，，尹世金兰珍李羽欣 ( ， 430074) 中南民族大学生物医学工程学院武汉 Im58 ， 4 PCＲ， overlap PCＲ Im58 摘要为表达钾离子通道阻断剂设计了条搭桥引物通过的方法扩增出蝎毒肽 DNA ， pGEX-4T-1 ， E． coli / Ｒosetta (DE3) ．全长片段选用表达载体将测序正确的克隆转化至大肠杆菌中通过检测 IPTG ，． IPTG ，不同诱导时间和浓度下融合蛋白的表达量筛选出最优表达条件表达蛋白经诱导后融合蛋白再经 GSH ，、 GST-Im58 ，ＲP- 亲和层析柱纯化将洗脱液经超滤浓缩脱盐纯化后得融合蛋白蛋白用小肠激酶酶切后通过 HPLC C18 ． Tricine SDS 柱分离获得色谱纯的蝎毒肽蝎毒肽通过系统的蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量， MALDI-TOF-MS ． :Im58 大小和纯度并由来精确测定重组多肽的分子量结果表明阳性克隆子证明成功构建了 Im58 原核表达载体，Tricine 系统的 SDS蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS 鉴定Im58 多肽表达纯化成功． ;Im58 ; ; 关键词钾离子通道阻断剂原核表达蛋白纯化中图分类号 TQ464 ． 9 ;Q784 A 文献标识码 A 文章编号 1672-4321 (2013)02-0036-05 Cloning ，Expression ，Purification and Identification of Im58 ， th