Cofilin-1慢病毒载体的构建及其在Huh-7中的过表达.pdfVIP

中南医学科学杂志2012年1月第40卷第1期 65 文章编号:2095-1116(2012)01-0065-05 ·基础医学· Cofilin鄄1慢病毒载体的构建及其在 Huh鄄7 中的过表达 1 2 2 1 2 龙晓兰 ,周摇 敏 ,石必枝 ,谢海龙 ,李宗海 (1.南华大学 医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001;2.上海交通大学附属仁济医院 上海市肿瘤研究所) 摘摇 要:摇 目的摇 构建Cofilin鄄1过表达的Huh鄄7 细胞株。 摇 方法摇 应用RT鄄PCR克隆出Cofilin鄄1的完整编码 序列,将其亚克隆到慢病毒载体pWPT 中,构建慢病毒载体表达质粒pWPT鄄Cofilin鄄1;将慢病毒表达质粒pWPT鄄Cofi鄄 lin鄄1或pWPT鄄GFP与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T 细胞,获得携带Cofilin鄄1完整编码序列的慢病 毒和携带GFP基因的慢病毒,将两种慢病毒分别感染Huh鄄7 细胞;通过Real鄄Time PCR和Western blot检测Huh鄄7 细胞中的Cofilin鄄1的过表达情况。 摇 结果摇 测序结果显示成功构建重组慢病毒表达质粒pWPT鄄Cofilin鄄1;慢病毒有 效感染Huh鄄7 细胞,依据GFP绿色荧光可测定感染有效率超过95%;Cofilin鄄1在Huh鄄7 细胞中的mRNA量和蛋白 水平都成功的过表达。 摇 结论摇 本实验的完成,为进一步研究Cofilin鄄1基因在肝癌中的生物功能和作用机制奠定 了基础。 关键词:摇 Cofilin鄄1;摇 慢病毒载体;摇 Huh鄄7 细胞 中图分类号:R730.53;R734.2摇 摇 摇 文献标识码:A Construction of Lentivirus Vector Cofilin鄄1and Overexpression of Cofilin鄄1in Huh鄄7 Cells LONG Xiao鄄lan,ZHOU Min,SHI Bi鄄zhi,et al (Cancer Institution,University of South China,Hengyang,Hunan421001,China) Abstract:摇 Objective摇 Construct the Huh鄄7 cells strains which is overexpression of Cofilin鄄1 gene.摇 Methods摇 The complete CDS of Cofilin鄄1genewas acquired by RT鄄PCR,and then subcloned into the lentiviral vector pWPT to con鄄 struct the expression plasmid of lentiviral vector pWPT鄄Cofilin鄄1.The plasmid was identified by sequencing.Recombinant lentiviruswas produced by293 T cellsfollowing co鄄transfection of pWPT鄄Cofilin鄄1or pWPT鄄GFP with the packaging plas鄄 midspMD2.G and psPAX2.The recombinant lentivirus Cofilin鄄1or GFP were respectively used to inf