PRMT2真核表达载体构建及在乳腺癌MCF7细胞的亚细胞定位.pdfVIP

550 Journal of Medical Science in Central South China,Nov.2012,Vol.40,No.6 文章编号:2095-1116(2012)06-0550-05 ·基础医学· PRMT2真核表达载体构建及在乳腺癌 MCF7 细胞的亚细胞定位 钟摇 警,陈亚军,杨摇 靖,曹仁贤,文格波 (南华大学附属第一医院临床医学研究所,湖南衡阳421001) 摘摇 要:摇 目的摇 构建携带人蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)基因的真核表达载体pEGFP鄄N1鄄PRMT2,观 察其转染乳腺癌MCF7 细胞后融合蛋白在细胞中的亚细胞定位,为进一步研究PRMT2基因在乳腺癌中的作用奠定 实验基础。 摇 方法摇 以本实验室保存的pGEM鄄T鄄PRMT2载体为模板进行聚合酶链反应(PCR)特异扩增PRMT2基 因片段,将扩增片段经Hind 芋和Sal 玉双酶切后克隆到pEGFP鄄N1载体,酶切与测序鉴定阳性克隆;激光共聚焦显 微镜观察融合蛋白在乳腺癌MCF7 细胞中的定位。 摇 结果摇 成功构建了pEGFP鄄N1鄄PRMT2 重组真核表达载体,融 合蛋白主要聚集成颗粒状分布于除核仁以外的核浆中,胞质中少量弥散分布。 摇 结论摇 pEGFP鄄N1鄄PRMT2 重组真 核表达载体的构建为进一步研究PRMT2基因在乳腺癌及其内分泌治疗中的作用奠定实验基础。 关键词:摇 乳腺癌;蛋白质精氨酸N鄄甲基转移酶;真核表达载体;亚细胞定位 中图分类号:R737.9摇 摇 摇 文献标识码:A Construction of PRMT2 Gene Eukaryotic Expression Vector and Subcellular Localization in Breast Cancer MCF7 Cells ZHONGJing,CHEN Yajun,YANGJing,et al (Institute of ClinicalMedical Research,the FirstAffiliated Hospital,University of South China, Hengyang,Hunan421001,China) Abstract:摇 Objective摇 To construct a eukaryotic expression vector pEGFP鄄N1鄄PRMT2 that can express the human protein arginine methyltransferase2 (PRMT2) and observe the subcellular localization of GFP鄄fusion protein in the trans鄄 fected breast cancer MCF7 cells under laser confocal scanning microscope in order to study the role of PRMT2 in breast cancer.摇 Methods摇 The PRMT2 genewas amplifiedfrom a vector pGEM鄄T鄄PRMT2,digested by Hind 芋and Sal 玉and then cloned intoeukaryoticexpressionplasmidpEGFP鄄N1whichwasalsodigestedby Hind 芋andSal 玉.Therecombinant plasmid of pEGFP鄄N1鄄PRMT2 was identified by enzyme digestion and sequence a