乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法.pdfVIP

应用报告 LC-001 乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法 三聚氰胺（Melamine ）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要 用于生产三聚氰胺- 甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、 皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国 家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品 中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008 ）和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液 相色谱法》（GB/T22400-2008 ）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条 件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回 收率均符合国家标准。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 LC1620 高效液相色谱仪（含 UV1620 紫外-可见检测器 1 台，P1620 高压恒流泵 1 台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330 色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯 仪器有限公司）；FA2004 分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）； TGL-16G-A 离心机 （上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(99%，上海安谱) ； 辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威) ；磷酸(分析纯) 、乙腈(色谱纯，美国 Tedia)、 纯净水(杭州娃哈哈) 。 1.2 标准品溶液配制 精密称取三聚氰胺标准品，溶于 50 ％的甲醇水溶液，配制称 1.422mg/ml 的标准 储备液，于 4 ℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准 工作液。 1.3 样品前处理 称取 2g 酸奶样品与 50ml 具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50 混合溶液 15ml， 充分混匀后超声提取 15min。取提取液250ul ，加入 0.1mol/l 盐酸 750ul，混匀， 以 12000r/min 离心 5min，取上清液，0.22um 滤膜过滤，作为 HPLC 测定溶液。 1.4 色谱条件： 色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm) 流动相：乙腈/缓冲盐=15/85 （缓冲盐：10mM 辛烷磺酸钠水溶液，含 0.1 ％磷酸） 流速：1.0ml/min 波长：240nm 温度：40 ℃ 进样量：20μl 2 实验结果 2.1 精密度实验 取浓度为 0.569μg/ml 三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样 5 次， 以各成分峰面积计算 RSD(%) ，所得结果如表 1 所示：保留时间相对标准偏差 （RSD ）为0.23 ％，峰面积RSD 为 0.57 ％。 表 1 精密度实验 NO. Retention time （min ） Peak High Peak Area 1 11.933 289 4216.8 2 11.990 290 4264.2 3 11.928 287 4246.0 4 11.927 287 4242.8 5 11.923 284 4218.6 RSD(%) 0.23 0.82 0.57 8.00 [mAU] 6.20 4.40