雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠慢性内脏痛过敏中的作用及其机制研究.doc

硕士学位论文 论文题目 雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠 慢性内脏痛过敏中的作用及其机制的研究  研究生姓名  陶景德  指导教师姓名  王少峰  徐广银  专 业 名 称 研 究 方 向 论文提交日期  消化病学 功能性胃肠病的机制研究 2013 年 3 月 雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠慢性内脏痛过敏中的作用及其机制的研究  中文摘要  雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠慢性内脏痛 过敏中的作用及其机制的研究 中文摘要 目的 肠易激综合征 （irritable bowel syndrome, IBS）患者的慢性腹痛、腹部不适等症 状是临床医生所面临的一大挑战。IBS 在女性人群中的发病率是男性人群中的 2-3 倍， 但是造成这种性别差异的机制尚未明确。本实验重点研究雌激素是否参与新生期结直 肠炎症（neonatal colonic inflammation, NCI）介导的慢性内脏痛觉过敏（chronic visceral hyperalgesia, CVH）的形成过程，及雌激素是否对肠相关的脊髓背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）的 P2X3 及胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase, CBS）的表达构 成影响。 方法 1， 慢性内脏痛觉过敏及去卵巢模型的制备 内脏痛觉过敏模型是通过向出生第 10 天 的雌性大鼠的直肠内注入浓度为 0.5%的稀乙酸，待大鼠成年时行卵巢摘除术 （ovariectomy, OVX）等操作。 2， 通过结直肠扩张实验（colorectal distension, CRD）观察腹壁撤回反射（abdominal withdrawal reflex, AWR）的表现来测量大鼠的行为学改变。 3， 用蛋白质免疫印迹分析法（western blotting, WB）观察分子的表达变化。首先提 取肠相关的脊髓背根神经节（DRG），然后用蛋白质免疫印迹分析法分析 P2X3 与 CBS 等分子表达的改变。 4，细胞学检测 用雌激素等药品孵育 DRG 神经元，并分析 P2X3 及 CBS 表达的变化。 结果  1.  NCI 组雌性大鼠在结直肠扩张实验（CRD）中在 20,40,60,80mmHg 压力下的 AWR  评分明显较对照组升高。我们观察到，这种效应在 7-11 周时较明显（*p0.05），在大 鼠 12 周时这种差异消失（p0.05）。 I 中文摘要  雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠慢性内脏痛过敏中的作用及其机制的研究  2.  NCI 组大鼠行去卵巢手术（OVX）后，其行为学 AWR 评分较手术前明显降低，  对照组（CON）大鼠行卵巢摘除术后则无此效应。去卵巢手术的 NCI 大鼠在每日给 予雌激素（OVX+E2）后，其 AWR 评分明显高于 NCI 大鼠去卵巢后仅给予溶剂的对 照组（OVX）大鼠。  3.  NCI 组大鼠 DRG 中 P2X3 及 CBS 的表达量明显较对照组 CON 升高。NCI 大鼠去 卵巢手术后 P2X3 及 CBS 的表达量均下降，每日给予雌激素维持的实验组去卵巢大鼠 （OVX+E2）DRG 中的 P2X3 及 CBS 表达量明显较去卵巢的实验组大鼠（OVX）升 高。  4.  NCI 大鼠 DRG 中 P2X3 的水平在腹腔注射 CBS 的拮抗剂 o-（羧甲基）羟胺半盐 酸盐（O-（carboxymethyl）hydroxylamine hemihydrochloride AOAA）后会出现明显的 降低。经硫氢化钠（NaHS，H2S 的供体）孵育过的 T13-L2 节段脊髓背根神经节（DRG） 神经元的 P2X3 水平较对照组明显升高。孵育雌激素的 T13-L2 节段的 DRG 神经元的 P2X3 和 CBS 的表达水平较对照组细胞明显升高，但若在孵育雌激素前先用 AOAA 孵 育细胞后，P2X3 表达升高的现象可被阻断。  5.  腹腔注射 AOAA 可剂量依赖性的降低实验组 NCI 大鼠的 AWR 评分，在健康的对  照组（CON）大鼠中则无此效应。 结论 P2X3 的高表达与 NCI 介导的内脏痛觉过敏密切相关，雌激素可通过提高 CBS 的 表达进而使 P2X3 的表达量升高。该通路可能是缓解 IBS 患者慢性内脏痛觉过敏的重 要靶点。 关键词： 雌激素；脊髓背根神经节；新生期结直肠炎症；慢性内脏痛过敏；硫化氢； P2X3；胱硫醚-β-合成酶；  作  者： 陶景德  指导教师： 王少峰 徐广银 II 雌激素在新生期结直肠炎症诱导的成年大鼠慢性内脏痛过敏中的作用及其机制的研究  英文摘要  Activation