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第 5 卷第 3 期 过 程 工 程 学 报 Vol.5 No.3 2005 年 6 月 The Chinese Journal of Process Engineering June 2005 酶转化异丁香酚制备香草醛的反应分离耦合方法 王丰收， 赵丽青， 孙志浩 (江南大学生物催化研究室，工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214036) 摘 要：大豆脂氧合酶粗酶转化异丁香酚制备香草醛的过程中存在产物抑制酶转化现象，吸附剂 HD−8 树脂可以有效 解除产物抑制，提高转化率. 确定了加入底物量 1.5%(ϕ) 、树脂量 150 g/L 的优化转化工艺，使反应与分离进行很好的 耦合，既提高了转化率，又能较好地实现底物和产物的分离. 在优化条件下香草醛最高转化量可达 3.41 g/L，相应的 摩尔转化率为 24.53%. 树脂洗脱法提取的产物得率为 67.11%，底物的回收率为 71.88%. 关键词：酶法转化；香草醛；异丁香酚；反应分离耦合 中图分类号：Q814.9 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2005)03−0273−04 1 前 言 99−6#大豆磨粉，石油醚脱脂后于冰箱中储藏备用. 标准品香草醛、异丁香酚和亚油酸购于 Sigma 公 香草醛，又名香兰素(Vanillin)，是香荚兰制品中的 司，异丁香酚原料购于北京北大正元科技公司. 重要组成部分，作为一种广谱型高档香料，广泛应用于 吸附树脂 HZ801, HZ802, HPD600 由上海华东理工 食品、烟草及医药工业，需求量很大. 香草醛目前主要 大学华震科技开发公司提供. 大孔阳离子树脂 D031 由 由化学方法制备，但用化学合成法制得的香草醛不是天 杭州争光树脂有限公司提供，大孔阳离子树脂 HD−2 和 然香料. 天然香草醛可以从香荚兰的花荚中提取，但这 HD−8、离子树脂 732, HZ004, JK110 及大孔阴离子树脂 样得到的香草醛量少而价高，不能满足日益增长的需求. D311, D202, D293 均由上海华东理工大学华震科技开发 用生物转化法生产生物香草醛的研究已经有一些 成功的实例[1−6] ，研究了各种微生物、植物细胞内合成 公司提供. 其他材料均为市售，甲醇为色谱纯，其他试剂为分 和降解香草醛的代谢途径，并在细胞、酶学、基因水平 上进行了广泛的研究，取得了很多研究成果. 其中法国 析纯. Lesage-Meessen 等[1]利用阿魏酸作为底物的二步法(先 2.2 大豆脂氧合酶粗酶液的制备 用黑曲霉将阿魏酸转化为香草酸，再用朱红密孔菌将香 按文献[9]的方法制备酶液. 草酸转化为香草醛)工艺路线已经有称为“生物香兰素” 2.3 转化、洗脱和分析方法 的产品上市. 笔者课题组也在这方面取得了成功[7,8]. 2.3.1 转化方法 近几年来还有一些用丁香酚或异丁香酚进行微生 用制备的 pH 8.0 的酶液作为酶源，250 mL 三角瓶 物转化或酶转化的研究[9−11]. 天然来源的丁香酚或异丁 装液量 20 mL ，加入 20 g/L