苏云金杆菌高毒力菌株40718的快速选育.pdfVIP

17 (4) 163～166 　　　　　　中国生物防治 　Chinese Journal of Biological Control 　　　　　　200 1 年 11 月 苏云金杆菌高毒力菌株 4 0718 的快速选育 丁学知 , 夏立秋 (湖南师范大学生命科学学院 , 长沙 　4 10081) 摘要 : 从湖南省不同生态区域的旱作地 、果园和稻田采集的 858 份土样中 ,分离筛选出苏云金 2c 杆菌 30 株 。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株 70 1 为出发菌株 , 经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变 ,显微涂片染色镜检 ,发现菌体的伴孢晶体的形状 、 大小 、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫效力密切相关 。以这些特征为参考进行快速初筛 和毒力生测复筛 ,筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4 07 18 。该突变株杀虫毒力与原始菌株相 比提高了75 倍 ,在 6 、12 和 24h 内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达 20 % 、97 %和 100 % 。 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续 10 代培养能稳定遗传 。 关 　键 　词 : 苏云金杆菌 ; 小菜蛾 ; 芽孢 ; 伴孢 ; 复合诱变 + ( ) 中图分类号 : S476 . 11 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 1005926 1 200 1 040 16304 ( ) 苏云金杆菌 B acil l us t h u ri ng iens is , Bt 作为微生物杀虫剂的首选菌种 ,其成功的推广和 应用[ 1 ,2 ] ,很大程度上都依赖于高毒力菌株的选育[3～5 ] 。我们从湖南省不同生态区域的旱作 地 、果园和稻田采集的 858 份土样的芽孢杆菌分离物中 ,筛选出 30 株具典型苏云金杆菌菌落 ( ) 特征的菌株 。选取其中一株经紫外线与亚硝基胍 N T G 复合诱变和定向筛选 ,获得了一株高 毒力杀虫菌株 ,并为高毒力杀虫菌株的选育提供了一种简单和快速的方法 。 1 　材料和方法 11 　土样 、菌株及试虫 从湖南省不同地区采集土样 ,分离菌株在微生物学研究室进行[5 ] 。试验用虫为小菜蛾 ( Pl utel l a xy los tel l a) 三龄幼虫 。 12 　培养基 ( ) 初筛培养基 g/ L :蛋白胨 100 ,牛肉膏 30 ,N aCl 50 , 固体培养基加琼脂 170 ,p H78 。 ( ) 复筛培养基 g/ L :黄豆饼粉 250 ,淀粉 50 ,CaCO 10 ,FeSO ·7 H O 002 ,p H78 。 3 4 2 13 　诱变处理方法 参照文献[ 6～8 ]进行 。 14 　初筛 将诱变处理的菌悬液适当稀释 ,取 01ml 分离培养基上涂平板 ,培养 24h ,再挑取单菌落 转管培养 ,然后每管涂片染色油镜观察 ,选取芽孢与伴孢的比例接近 125 ∶1 、伴孢形状为棱形 的菌株作为复筛毒力测定菌株[3 ] 。 收稿 日期 : 　　 ( ) ( ) 基金项 目: 湖南省中青年科技基金项 目 9609 ;湖南省农业重大攻关项 目 99W KY100408 ( ) 作者简介 :丁学知 1956 ,女 ,硕士 ,副教授 。