贵阳腐霉类胰蛋白酶纯化的初步研究.pdfVIP

第 33卷 第 5期 右江民族医学院学报 Vo1．33NO．5 2011年 10月 JournalofYoujiangMedicalUniversityforNationalities Oct．201l 贵阳腐霉类胰蛋 白酶纯化的初步研究① 段斯亮 。于声 。苏晓庆 ，唐荣兰 。申海光 。马新博 (1．柳州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室，广西 柳州 545006 E—mail：dsllzmc@ 163．corn； 2．柳州医学高等专科学校检验教研室，广西 柳州 545006； 3．贵阳医学院生物学教研室，贵州 贵阳 550004) 摘 要：目的 对贵阳腐霉(Pythiumguiyangense)类胰蛋 白酶(trypsin—likeprotease，Pr2)进行初步的分离、纯化。方法 将该菌诱导24h后获得 的粗酶液 ，经过PEG20000的包埋浓缩、透析，和两次SephadexG一100凝胶层析后 ，进行 SDS— PAGE 电泳检测和分子量测定 。结果 纯化 的Pr2蛋 白酶经 SDS—PAGE考马斯亮蓝染色显示为单一条带。分子量为 31．5kDa。结论 本研究初步纯化 了贵阳腐霉 Pr2蛋 白酶，测得分子量为 31．5kDa，为针对贵阳腐霉 Pr2蛋 白酶的进 一 步研究有重要意义。 关键词 ：贵阳腐霉；Pr2蛋 白酶；分子量 中图分类号 ：Q936；Q55 文献标识码 ：A 文章编号：1001—5817(2011)05—0603—03 doi：10．3969 ．issn．1001—5817．2011．05．001 Astudyonpurificationoftrypsin—likeprotease(Pr2)ofPythiumguiyangense DUAN Si—liang ，YU Sheng2，SU Xiao—qing ，TANGRong—lan ，SHEN Hal—guang MA Xin—bo ， (1．DepartmentofPathogenBiologyandImmunology，LiuzhouMedicalCollege，Liuzhou， Guangxi545006，ChinaE—mail：dsllzmc@ 163．CODl；2．DepartmentofLaboratoryMedicine， LiuzhouMedicalCollege，Liuzhou，Guangxi545006，China；3．DepartmentofBiology， ． GuiyangMedicalCollege，Guiyang，Guizhou550004，China) Abstract： Objective ToIsolationandpurification0ftrypsin—likeprotease(Pr2)ofPythiumguiyangense． Methods Thecuticle—degradingproteaseswereinduced from entomopathogensisfungus，P．guiyangensefor24 hourswithcicadaexuviae．Afterthecrudeenzymicfluidunderwentembedding，concentrationanddialysisbyusing PEG20000。andafterfinishedwithsephadexG一 100ge1chromatographytwice，theSDS—PAGE electrophoresis