骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的研究进展及中药干预的前景展望.docVIP

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的研究进展及中药干预的前景展望 作者：冼绍祥， 汪朝晖， 杨忠奇， 李南夷， 赵立诚 【关键词】 骨髓祖代细胞；,,心肌细胞；,,综述,指导性 　摘要：综述了骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的生物学特征，体外培养诱导MSCs分化成为心肌细胞，体内心肌微环境诱导MSCs生成心肌细胞及中药在MSCs诱导分化上的突破等研究概况。认为中药在MSCs诱导分化上的突破是国内外学者为修复坏死的心肌组织而进行对MSCs诱导分化为心肌细胞的有益尝试。以抗肿瘤药物5氮胞苷作为诱导剂对MSCs进行诱导，诱导分化率不高，且有一定的局限性；根据中医药在防治心脑血管疾病方面取得较好的疗效，及不少研究表明中药或其有效成分能有效地诱导MSCs分化为神经元细胞，并且其诱导率比传统西医学方法高，展望中药有可能诱导MSCs分化为心肌细胞。采用中药有效成分作为诱导剂对MSCs进行诱导分化，这不仅为应用中医药治疗心肌梗塞提供新的理论依据，而且有可能与细胞移植的方法相结合治疗某些心血管疾病，可作为现代治疗方法的补充手段，为临床研究带来广阔的应用前景。 关键词：骨髓祖代细胞； 心肌细胞； 综述，指导性 心肌梗塞后存活的心肌减少、继发心室重构，是造成心肌梗塞患者发生心力衰竭(心衰)、心律失常甚至死亡的重要原因。心肌细胞不能再生，损害的心肌细胞不能修复和分化，故临床中西药物治疗、介入治疗和手术治疗都很难取效，而心脏移植由于手术复杂、供体困难和费用高等原因，在临床很难推广。因此，寻找可代替死亡细胞的移植物来防治心肌梗塞后的心衰、心肌重构，改善心功能，是近年来研究的热点。 近年的研究发现，骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有自我更新、分化增殖和多向分化潜能的特点，在一定的环境和刺激因子作用下可分化为组织细胞，如成肌细胞（包括心肌细胞）、骨细胞、软骨细胞、神经细胞及脂肪细胞等［1］，且在体外培养的过程中能始终保持其多向分化潜能。在组织工程中，MSCs作为一种重要的种子细胞越来越引起人们的关注。将MSCs诱导分化为心肌细胞来修复死亡的心肌组织，具有一定的临床意义。本文就目前体内外诱导MSCs成为心肌细胞的研究状况进行综述，并对中医药在此领域的应用前景作一展望。 1 MSCs的生物学特征 MSCs属于非造血细胞，其基本特点是贴壁生长，呈纺锤状的纤维细胞样形态，具有巨大的培养增殖潜力和独特的细胞表型，并呈现为表面抗体SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124和CD166阳性，CD14、CD34、CD45阴性［1－2］。MSCs在培养过程中经过连续多代培养，仍能维持正常染色质组成及端粒活性，因而具有很大的体外培养扩增能力。Reyes 等［3］研究认为MSCs具有独特的表型和巨大的培养增殖能力，细胞可以扩增到15～70倍细胞周期； Guo等［4］的研究提示多种细胞因子如肿瘤坏死因子α（TNFα），干扰素γ（INFγ），干细胞因子（SCF）及胰岛素样生长因子1（IGF1）能明显促进MSCs增殖；细胞化学结果显示，几乎所有MSCs呈萘酚醋酸酯酶（ANAE）及糖原（PAS）反应阳性，而呈酸性磷酸酶（ACP）及苏丹黑（SB）反应阴性。Biano等［5］采用体外培养和体内移植发现骨髓间充质细胞的存在；他们在体外培养MSCs时发现，在低密度培养时，每个细胞很快贴壁生长并形成克隆的、非巨噬细胞性的、成纤维细胞样的细胞系，在合适的实验条件下可分化为多种结缔组织，如骨、软骨、脂肪组织、纤维组织和骨髓支持基质等；体内移植实验发现一部分克隆细胞系可以完全建立骨髓间充质，形成骨细胞、骨髓支持基质和脂肪细胞，说明MSCs是多向分化潜能的干细胞而非定向分化的祖细胞［6-10］。Weissman［11］认为MSCs不但能大量增殖，而且在一定条件下可以分化为骨、软骨、肌腱、肌肉、神经和造血微环境组织等，表明MSCs 有很高的可塑性。 2 体外培养诱导MSCs分化为心肌细胞 1995年Wakitani等［12］在体外培养中将骨髓间充质细胞经2次细胞传代后，以5氮胞苷进行?24?h?诱导，于7～11?d?后得到长的多核肌管，而且此肌管对骨骼肌细胞特异性肌球蛋白单克隆抗体染色为阳性，从而确定MSCs可以于体外诱导成为骨骼肌细胞。在此基础上，Makino等［13］及Fukuda［14］最早用大鼠MSCs在体外连续传代培养，暴露于5氮胞苷中，结果成功地诱导出心肌细胞。在小鼠胚胎细胞系向心肌细胞分化的研究中，Konieczny等［1