氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达CD68的影响.pdfVIP

· 68 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2009Feb；44(1) ◇药学研究◇ 氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达 CD68的影响 黄学桂 ，王法财 ，王海萍 ，路锦涛 ，沈玉君 ，沈玉先 摘要 目的 观察氯化钆 (GdC1)对大鼠腹腔 巨噬细胞 炎 (adjuvantarthritis，AA)大 鼠腹腔巨噬细胞(peri— (PMI())表达 CD68是否有抑制作用。方法 取正常大 鼠 tonealmacrophage，PM(P)转为阴性，而不影响细胞 PM(I)体外培养，用不同浓度的GdC1处理PM中；采用弗氏完 的形态 ；同时也观察了GdC1对正常大鼠PM~CD68 全佐剂(FCA)诱导大鼠佐剂性关节炎 (AA)模型并尾静脉注 表达的影响。该研究结果对我们进一步认识 GdCI 射GdC1。采用免疫荧光双标、Westernblot法检测PM(I)活 对巨噬细胞活化功能的抑制作用提供了新的实验依 化标记物CD68的表达情况。结果 在一定的浓度范围内， 据，也为我们更好地了解 GdC1，的作用机制提供了 GdC1可抑制体外培养的正常大鼠PM(P中CD68的表达，以 帮助。 5×10“mol／L浓度抑制效果最明显。大剂量的GdC1对细 胞有明显的毒性作用，表现为细胞的形态和核发生改变，并 1 材料与方法 可诱导内质 网(ER)应激相关蛋 白ARMET的表达。对于 AA大鼠活化的PMqb，体内注射GdC1(10mg／kg)可使部分 1．1 实验动物 SD大鼠(SPF级)，6，体重200— CD68阳性的PM中转 阴，同时促进这些阴性细胞的分化； 220g，安徽省实验动物中心提供 (皖实动物准字第 GdC1并可诱导部分活化的PM(I)凋亡。结论 GdC1可以 01号)。 抑制大鼠PMqb中CD68的表达及诱导活化的PMqb凋亡，这 1．2 药物与试剂 氯化钆(GdC1 ·6HO)为美国 可能是 GdCl抑制PM中活化的机制之一。 Sigma公司产品。鼠抗 CD68单克隆抗体购 自AbD 主题词 氯化SL／药理学 ；关节炎，佐剂性；巨噬细胞，腹膜 Serotec公司，兔抗 ARMET多克隆抗体 由美国马利 自由词 CD68；ARMET 兰大学方圣云教授惠赠，B—actin为北京博奥森公司 中图分类号 R657．5 产品；AlexaFluor一568标记 的抗兔 IgG、AlexaFluor． 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2009)01—0068—05 488标记 的抗 鼠IgG购 自Invitrogen公司；DAPI为 钆(Gd)属镧系的一种稀有元素，主要以氯盐三 Sigma公司产品；DMEM完全培养基为Gibco公司产 氯化钆(gadoliniumchloride，GdC1)的形式存在 ¨。 品；卡介苗由上海生物制品研究所生产；牛血清白蛋 GdC1具有抑制肝脏 Kupffer细胞吞噬、分泌的作 白(BSA)购 自Roche公司。其余试剂均为国产分析 用，故常被作为工具药，广泛用于研究单核／巨噬细 纯 。 胞系统功能及其在多种疾病发病机制中的作用 J。 1．3 AA模型的制备 参照文献方法 ，将卡介苗 (BCG)80~C水浴 1h灭活后，用高压灭菌的液体石 GdC1可通过抑制巨噬细胞的活化，减少炎症介质 (如TNF一、IL一1B、IL-6等)的