生物工业分析第五章.pptVIP

气相色谱分析 　　（6）根据波长选择比色皿。350nm以上可选用玻璃比色皿，350nm以下一定要选用石英比色皿。将装好溶液的比色皿放入比色皿架内，然后将盖板盖好。 　　（7）调节暗电流旋钮，使电表指针到零，为了得到较高的准确度，每测量一次，暗电流应随时校正一次。 　　（8）调节灵敏度旋钮，一般从左面停止位置按顺时针方向转动约三圈，此时度数盘转动1％透光率，电表指针可偏转3小格。 　　（9）拉动比色皿架拉杆，将空白溶液移入光路。 　　（10）调节读数电位器旋钮，使透光度读数指示在透光度100％处。 　　（11）将选择开关拨至“×1”档。 　　（12）拉开暗电流闸门，使单色光射入光电管。 气相色谱分析 　　（13）调节狭缝旋钮，大致使电表的指针指零，然后再用灵敏度旋钮作精细调节，使电表的指针准确地指在零位。 　　（14）移动比色皿架拉杆，使待测溶液移入光路。这时电表的指针偏离零位。 　　（15）旋转读数电位器旋钮，重新使电表的指针指在零位，此时从吸光度读数盘上即能读取吸光度。依次拉出一格试样，旋动读数电位器旋钮，使电表重新指零，可从吸光度读数盘上读得相应得吸光度。 　　注意：从读数窗读取待测溶液得透光度或吸光度值，当选择开关置于“×1”档时，透光度范围时0～100％，相应得吸光度范围是∞～0。可以直接读数，不需换算。当试液浓度过大，其透光度小于10％，吸光度大于1时，可把选择开关置于“×0.1”档，以获得较准确得读数，此时所读出得透光度值应以10除之，或把读出得吸光度值加上1.0。 气相色谱分析 　　（16）更换试样或暂停测试时，必须将暗电流控制闸门拉杆关闭，以保护光电管。 　　（17）测试几个试样时，可重复上述操作。但需经常用空白溶液校准透光率100％。 　　（18）使用完毕后，将仪器复原。 　　对于仪器的维修，应注意的是：① 经常更换仪器中的干燥剂，发现变色应及时取出烘干后再用；② 仪器停止工作时，必须切断电源，将选择开关放在“关”，狭缝转到0.01刻度，波长旋在625nm，透光率旋钮放在100％；③ 使用半年以上或搬动后，要进行波长精确性的检查。 气相色谱分析 　　二、应用实例 　　1.啤酒中双乙酰含量的测定（比色法） 　　基本原理　邻苯二胺与双乙酰反应如下： 　　反应中生成的产物2，3-二甲基喹喔啉的盐酸盐在335nm处有一最大吸收值，可对连二酮进行定量测定。结果以双乙酰含量表示。 气相色谱分析 　　②试剂与仪器 　　试剂　（a）4mol/L盐酸溶液　量取50 mL浓盐酸，用重蒸水稀释至150mL。 　　（b）1%邻苯二胺溶液　准确称取分析纯邻苯二胺0.2500 g溶解于4mol/L盐酸溶液，并用4mol/L盐酸溶液定容至25mL，摇匀。贮存于棕色瓶中，本试剂应当日配制。若配制出来的溶液呈红色，应重新更换新试剂。 　　（c）消泡剂　有机硅消泡剂或甘油聚醚。 　　仪器　（a）紫外分光光度计 　　（b）双乙酰蒸馏装置如图5－5所示。 气相色谱分析 1－夹套蒸馏气 2－2000mL水蒸汽发生器 3－冷凝器 4－25mL量筒或容量瓶 5－进样口 6－电炉 7－排气夹子 图5－5　双乙酰蒸馏装置 气相色谱分析 　　③测定步骤 　　（a）蒸馏　按图5－5把双乙酰蒸馏装置安装好，把排气夹子7打开，冷凝器下端浸没在盛有2.5mL蒸馏水的25mL量筒的水中，量筒同时用冰水冷却。加热蒸汽发生器至沸，通汽加热夹套蒸馏器，备用。向另取的100mL量筒中加入2～4滴消泡剂，再注入5℃左右未除气啤酒100mL。待夹套蒸馏器下端开始冒大汽时，打开进样口瓶塞，将啤酒迅速注入到蒸馏器内，再用10mL蒸馏水冲洗量筒，洗液同时倒入蒸馏器内，迅速盖好进样口塞子，用水封口。待下端再次冒大汽时，将排气夹子夹住，开始蒸馏，接馏出液，直到馏出液接近25mL时，取下接受量筒，用少量蒸馏水冲洗冷凝管的下端，并入接受量筒，然后用蒸馏水定容至25mL，摇匀。 气相色谱分析 　　（b）显色　混匀馏出液，分别吸取10mL馏出液于两支比色管中。一管作为样品管加入0.5mL1%邻苯二胺溶液，另一管不加1%邻苯二胺溶液作空白，充分摇匀后，同时置于暗处放置20～30min，然后于样品管中加2mL4mol/L盐酸溶液，于空白管中加2.5mL4mol/L盐酸溶液，混匀。 　　（c）测定 在335nm波长处，用2cm比色皿以空白做对照，测定样品的吸光度。 　　④计算　啤酒中双乙酰的含量按下式计算： 　　　　双乙酰（mg/L）=A335×1.2 式中：A335——用2cm比色皿测得的样品的吸光度。 1.2——换算系数。多次用纯双乙酰测得的经验数值。　　如果实验中使用的是1cm比色皿，则换算系数应为2.4。 气相色谱分析 　　⑤