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附錄 VII 霉菌毒素（黃曲霉毒素）測定方法 附錄 VII 霉菌毒素（黃曲霉毒素）測定方法 霉菌毒素包括黃曲霉毒素，是指霉菌或真菌產生的毒性代謝產物。藥材可能會 受黃曲霉毒素污染，應用本法測定藥材中黃曲霉毒素B 、B 、G 和G 的含量。 1 2 1 2 方法 （1） 黃曲霉毒素測定法 — 所選分析方法必須通過驗證並符合下列要求： （a ） 方法應適合於擬測定黃曲霉毒素，且不易受藥材提取物的干擾； （b ） 確定擬測定黃曲霉毒素的檢測限及定量限； （c ） 各個黃曲霉毒素的定量限設定為0.3 µg/kg ； （d ） 加樣回收率應在50 - 120% 範圍之內； （e ） 方法重覆性的相對標準偏差應小於15% ； （f ） 儀器檢測的校對範圍應呈綫性反應 。 （2 ） 試劑 —分析所用的試劑須為分析純或等同。所用甲醇及乙腈須為色譜純或 以上。 （3） 容器 — 所有容器須清洗後方可使用，以確保無黃曲霉毒素的污染。容器可 用10% 家用漂白液浸泡至少12小時後，再用蒸餾水沖洗。 （4 ） 樣品製備 — 藥材樣品必須先粉碎。如需要，磨碎前可先將藥材切碎。在可 行的情況下，取樣量應不少於測試用量之五倍。 （5） 操作程序 — 本方法依據黃曲霉毒素B 、B 、G 和G 經碘衍生化，並經紫 1 2 1 2 外綫激發後，測定其熒光強度。個別藥材樣品操作程序可適當修改。 （a ） 提取 — 取樣品粉末15.0 g ，加氯化鈉3 g 和70% 甲醇75 mL ，充分攪 勻約2 分鐘後，離心約10分鐘。測定提取液酸鹼值。精密吸取上清液 ] 15 mL [附註1 置黃棕色小瓶中，於60˚C 水浴上用氮氣將溶劑揮發至 A-26 附錄 VII 霉菌毒素（黃曲霉毒素）測定方法 約5 mL 。依據免疫親和柱說明書的要求，在濃縮提取液中加適用於免 疫親和柱的溶劑至50 mL [ 附註2] ，離心約10分鐘後，用玻璃纖維濾紙 抽濾，收集濾液，作為供試品溶液。 附註1 ：如提取液被樣品吸收使所得上清液少於40 mL ，則應按上法重 新提取，改用氯化鈉5.0 g 和 70% 甲醇125 mL 提取，並改為取上清液 25 mL 。 附註2 ：如樣品處理所得的提取物會影響免疫親和柱的功能，應以免 疫親和柱說明書要求適當處理。特別注意免疫親和柱酸鹼度的操作範 圍要求和在淨化前選用合適的溶劑稀釋提取物。 （b ） 以免疫親和柱淨化供試品溶液 — 此色譜淨化步驟可選用： •免疫親和柱：內含黃曲霉毒素B 、B 、G 和G 專有抗體； 1 2 1 2 •洗脫液：甲醇。 免疫親和柱的操作要求 — 將適當容量的黃曲霉毒素B 、B 、G 和G 1 2 1 2 標準混合溶液通過免疫親和柱，並根據下述「淨化供試品溶液」程序處 理，回收率應分別不小於90% 、80% 、90% 和60% 。 [ ] 淨化供試品溶液 附註3 — 依據說明書，先將免疫親和柱預調，以流