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28 3 Vol. 28, No. 3
2009 8 JOURNAL OF OCEANOGRAPHY IN TAIWAN STRAIT Aug. , 2009
1 2 3 1 1 1
黄乾生, 陈超琪 , 谢晓兰, 王 烨 , 石 艳, 陈清西
( 1. , 361005;
2. , 100082; 3. , 362000)
: 几丁质酶是甲壳动物顺利完成生理性蜕壳的关键功能酶. 已有研究表明几丁质酶是一个多
因家族.根据甲壳动物几丁质酶保守序列设计引物, 应用反转录 PCR 方法从凡纳滨对虾
(L itopenaeus vannamei) 内脏中扩增得到部分几丁质酶编码 因片段, 进一步结合 RACE法, 克隆得
到该几丁质酶完整编码序列. 生物信息学分析表明其含有信号肽序列几丁质酶催化中心序列
PEST连接区和几丁质底物结合部位序列. 序列比对发现其与中国对虾( ABB85237. 1)斑节对虾
(AF157503. 1)和日本对虾几丁质酶( BAA 12287. 1)具有很高的相似度.
: 生物信息学; 凡纳滨对虾; 几丁质酶; 因克隆; 序列比对
: Q 356. 1 : A : 2009)
( EC 3. 2. 1. 1 ). ,
[ 1]
. . , 18
[ 2]
. .
, .
[ 3]
, , , , .
, . (L itopenaeus vannam ei)
, , , ,
. , .
, ( nucleotide accession
number: AF315689). , , .
1
1. 1
RNA Trizol Invitrogen . Taq Fermentas. MMLV
PMD18TTakara. M arker. OMEGA
. . DH5. .
1. 2
1. 2. 1 因克隆 Trizol RNA, MM LV
cDNA. NCBI genebank 3, ( Fenneropenaeus
chinensis)(Penaeusmonodon)(M arsup enaeus jap onicus).
3
, chi11f ch i11r( 1). PCR 20mm
3 3 3 3 3
2mm buffer2mmol/dm MgCl0. 5mol/dm 1mm cDNA 1U Taq0. 2mmol/dm
2
: 2008092
: ( 2006N0067); ( 20070 10806)
: ( 1982~ ), , .
: , , (); Em ail: chenqx@ xm u. edu. cn
! 356! 28
dNTP. : 95 3m in, 95 0s, 58~ 62 0s, 72 1m in 50s, 35 ; 72
7m in. PCR 1%.
PCR, OMEGA PCR . DNA PMD18T
, DH5, . , ,
PCR, ( ).
RACE( cDNA ).
: GSP1 GSP2 ( 1
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