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哺乳动物精子性别特异膜蛋白的研究进展* 中国生物工程杂志China Biotechnology, 2006, 26(1):65～68 王栋王振铃程金华朱化彬**郝海生刘永华 （中国农业科学院畜牧研究所北京100094） 摘要在精子形成过程中，存在性染色体特异基因的表达，这是X、Y精子膜蛋白差异形成的基础。尽管精子形成过程中形成的细胞间桥可能使精子细胞间共享基因表达产物，但雄性传递偏移现象和性别偏移现象的发生又证明两类精子间存在非共享蛋白，同时HY抗原表位的成功鉴定、精子分离实验结果以及性别特异蛋白的检测结果都肯定了精子膜蛋白差异的存在，只是这种膜蛋白的差异很小。蛋白分离技术的进步及技术间的优化集成，为精子间细微差异膜蛋白的分离提供了可能。 关键词差异膜蛋白精子基因表达 中图分类号Q512.8 收稿日期：20050630修回日期：20051031 *国家“863”计划资助项目(2004AA243011） ** 通讯作者，电子信箱：huabinzhu@正常雄性哺乳动物的精子，就其所含性染色体的不同可分为X精子和Y精子，卵子与X精子受精形成雌性动物，而与Y精子受精则形成雄性动物。如能有效地对精子进行分离则可实现动物的性别控制，这不单对于畜牧生产具有重要的现实意义；同时对于有效控制人类伴性遗传疾病的垂直传播，实现优生优育同样具有重大意义。目前，流式细胞分离法是畜牧生产中仅有的能进行高纯度（90%左右）X、Y精子分离的技术，但该技术分离速度有限，每小时仅能分离X、Y精子各1 100万个［1］，分离一头牛一次射精量需要几天时间，远远不能满足生产上对性控精液的大量需求，同时昂贵的仪器及专利限制都迫使科研人员不得不再寻找新的分离技术方法。同众多精子分离方法相比较，HY抗原抗体分离法是最简洁的方法，但由于HY抗原特异性的原因［2］，其分离效果远不能达到要求。如能找到两种精子的其它差异膜蛋白，就可以利用抗原抗体反应进行大规模快速的精子分离，然而这方面的研究一直都没有取得令人满意的结果，学界也因此对两类精子间是否存在膜蛋白差异提出了质疑，近来这方面的报道甚少，因此探讨两种类型精子膜蛋白的差异具有非常重要的理论和现实意义。 1单倍体X、Y精子间遗传基础及基因表达的差异Skaletsky等［3］报道，在人的Y染色体上有一段雄性特异区（The malespecific region of the Y chromosome, MSY）与性别分化有关，这段区域约占Y染色体的95%，在精子形成的减数分裂过程中不会发生重组，该区域含有156个已知的转录单位，包含了78个蛋白编码基因；在其他物种中也有很多关于Y染色体特异基因的报道［4］，性染色体特异基因的不同就构成了两类精子间表达差异的遗传基础，而性染色体特异基因在配子形成过程中的表达与否也就成为了两类精子蛋白差异的生物学基础。 有关后成修饰（epigenetic modification）的研究表明，精子本身存在不同于胚胎和成体的基因表达。高等生物靠遗传物质的程序化和再程序化的周期性改变来实现世代循环，而这种程序化的改变主要通过DNA的甲基化和去甲基化来完成。特定生命阶段遗传物质甲基化程度的变化改变了生物体该阶段的基因表达，实现了器官的分化和生命个体的生长发育。这种程序化的改变分为两个阶段，即配子时期和胚胎时期［5］。配子形成过程中，雌雄配子的染色体都发生了较短暂的去甲基化，而配子形成后又重新恢复较高的甲基化状态［6,7］。根据配子形成过程中甲基化程度的改变，推测这一过程中存在精子特异基因的表达，当然也包含性染色体特异基因的表达，结果含有不同性染色体的精子可能具有不同的基因产物。 2006, 26(1)王栋 等： 哺乳动物精子性别特异膜蛋白的研究进展 中国生物工程杂志 China Biotechnology Vol.26 No.1 2006 关于基因表达检测的研究表明，在精子形成的减数分裂粗线期，为防止一些酶类与性染色体发生作用，两条性染色体高度浓缩形成性体（sex body）。性体的形成保护了性染色体，并且关闭了性染色体特异基因的表达［8］。对小鼠的研究发现，减数分裂过程中，除Xist基因表达外，几乎所有的性染色体基因都没有表达［9］。然而减数分裂后期，一些性染色体特异基因开始表达。Hendriksen等［9］及Rossi等［10］在单倍体精子细胞中分别检测到Y染色体基因Sry的转录产物，Hendriksen等［9］在研究中还检测到Zfy的转录产物；同时在圆头精子中也检测到了Ube1y的mRNA，并且Sry和Ube1y的mRNA水平都很高。Conway等［11］检测到Y染色体长臂多拷贝基因Y353/B与精子头部形状有关，该基因存在多拷贝，部分缺失时可导致精子头部的部分畸形，全部缺失时导致精子