NY_T 1286-2007 花生黄曲霉毒素B1的测定.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1286－2007 花生黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法 Determination of Aflatoxin B1 Content in Peanut- High Performance Liquid Chromatography 2007-04-17 发布 2007-07-01 实施  前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、张文、丁小霞、谢立华、陈小媚、李光明、陈洪。花生黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法B1含量的方法。本标准适用于花生中黄曲霉毒素B1的测定。本方法检出限为1.0g／kg。 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 5491 粮食、油料检验扦样、分样法 GB 6682实验室用水规定(GB 6682--1992，eqv ISO 3696--1987)样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、衍生化，反相C18柱分离后，在激365nm，荧光波长440检测，外标法定量，计算样品黄曲霉毒素B1含量。下列试剂除注明外均为分析纯，水为GB 6682规定的二级水。甲醇，色谱纯。乙腈，色谱纯。 甲醇溶液(含4％氯化钠)，称取4g氯化钠(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL水的混合溶液。三氟乙酸。石油醚(60℃～90℃)。三氯甲烷。黄曲霉毒素Bl标准储备液，10 mg／L。天平，感量±1 mg。切片机。粉碎机。旋涡混合器超声波清洗器，功率不低于50。干热氮吹仪，控温精度50℃±2℃。中速定性滤纸。烘箱，控温精度50℃±2℃。0.45μm有机相滤膜。Nova—pak C18色谱柱(3.9×150mm)。液相色谱仪(带荧光检测器)。 按GB 5491执行。样品中的水分及挥发物含量超过10％时，在45℃左右的条件下通风干燥。将干燥的花生样品在切片机中切片至0.5 左右，再经粉碎机粉碎，过0.42筛。 提取 称取20g(精确至10 mg)样品，置于250L具塞锥形瓶中，加60L甲醇溶液(4.3)。50℃±2℃水浴超声提取5(每隔1 min取出旋涡混合1次)，过双层中速定|!生滤纸(5.7)，收集滤液于小烧杯中，取滤液10L于试管a中，加人5L石油醚(4.5)，旋涡混合30S，静置2min，待分层后，弃上层，取下层溶液5mL于试管b中，加入5止三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2，取出上层于试管C中，再加入5mL(4.6)至试管b中，旋涡混合10S，静置2，取上层。合并两次提取液于试管C中。柱前衍生 将提取液置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，加入200L衍生试剂(4.4)，盖好塞子，旋涡混合30 s，50℃烘箱中衍生5，置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，用1 mL流动相溶解，过有机相滤膜(5.9)，滤液用液相色谱分析。色谱分析 取黄曲霉毒素B1标准储备液(4.7)，用甲醇(4.1)稀释至20g／L、40g／L、80g／L、160g／L320μg／L标准使用液连同样品依次进样，进行液相色谱检测，建立工作曲线。色谱条件：流动相：乙腈+甲醇+水=1312+75，流速：0.8 mL／min，进样量10L，柱温30℃，检器：EX：365，EM：440n。 B1含量以质量分数计，单位以微克每千克表(g／kg)，按公式(1)计算： W = m1×————×—————— ………………… (1) V2 m 式中：——从工作曲线上计算出进样体积样品中黄曲霉毒素B1质量，单位为微克(pg)；——加人流动相体积的数值，单位为毫升(mL)；——进样体积，单位为微升()； D——样液的总稀释倍数；m——试样质量，单位为克(g)。计算结果保留小数点后一位。 测定结果用算术平均值表示。两次平行测定结果的相对相差小于10％。 1 NY/T 1286—2007 2 1 NY/T 1286—2007 ICS 67.050 B 33 中华人民共和国农业部 发布