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中国动物传染病学报 2014,22(1): 16-24 Chinese Journal of Animal Infectious Diseases
·研究论文·
H3 、H9 亚型禽流感病毒双重荧光定量 PCR 方法的
建立及初步应用
1,2 2 2 2 2 2 2 2
申伟霞 ，田巧珍 ，陈 圆 ，胡 涛 ，闫丽萍 ，李国新 ，李雪松 ，滕巧泱 ，
赵宇军 1 ，李泽君2
（1. 山西农业大学动物科技学院，太谷 030801; 2. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241 ）
摘 要：虽然H3 、H9 亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus, AIV ）是低致病性禽流感病毒，但其具有跨宿主感染哺乳动物的能
力，对社会公共卫生安全具有重大的潜在危害，因而对这些亚型病毒的监测极其重要。通过比对GenBank 上H3 、H9 亚型禽流
感病毒HA 基因序列，设计了分别针对H3 AIV 和H9 AIV 的特异性探针。特异性试验和标准曲线试验的结果显示，这两个探
针仅分别特异性识别H3 、H9 亚型AIV ，且具有较好的扩增效率。通过重组质粒pMD19-T-H3HA 和pMD19-T-H9HA 10 倍梯度
稀释液为模板，进行敏感性实验。结果表明，本研究所建立的荧光定量PCR 方法能检测到100 个DNA 拷贝数H3 AIV 和10 个
DNA 拷贝数的H9 AIV ，比传统PCR 方法敏感性分别提高了100 倍和 1000 倍。此外，本方法还能检测到 10 EID 的H3 亚型
50
AIV 或H9 亚型AIV ，比传统PCR 方法检测敏感性均提高了1000 倍。批间和批内试验的变异系数均小于3% ，表明本研究建立
的方法具有较好的重复性。此外，与传统PCR 方法相比，用H3 、H9 亚型AIV 双重荧光定量PCR 方法检测人工感染动物的肺
组织时，针对H3 AIV 的敏感性提高了10~100 倍，针对H9 AIV 的敏感性提高了100 倍。综上所述，本研究所建立的H3 、H9
亚型禽流感病毒双重荧光定量PCR 方法具有较高的特异性和敏感性，对H3 、H9 亚型禽流感病毒监测具有重要的应用价值。
关键词：H3 ；H9 ；禽流感病毒；荧光定量PCR
中图分类号：S852.659.5 文献标志码：A 文章编号：1674-6422 （2014 ）01-0016-09
DEVELOPMENT AND PRELIMINARY APPLICATION OF FLUORESCENT
QUATITATIVE PCR ASSAY FOR DETECTION OF H3 AND H9 SUBTYPES OF
AVIAN INFLUENZA VIRUS
1,2 2 2 2 2 2
SHEN Wei-xia , TIAN Qiao-zhen , CHEN Yuan , HU Tao , YAN Li-ping , LI Guo-xin ,
2 2 1 2
LI Xue-song , TENG Qiao-yang , ZHAO Yu-jun , LI Ze-jun
(1. College of animal science and technology, Shanxi Agri
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