实验四、不同的温度处理对叶菜品质的影响.pptVIP

实验四、不同的温度处理对叶菜品质的影响 一、目的 叶菜在贮藏过程中，随着贮藏期的延长，叶菜逐渐衰老，叶片绿色逐渐消失、黄化，叶绿素含量不断下降，叶片中的含氮物质主要是蛋白质的含量也在下降。不同的贮藏方式、不同的贮藏温度对于叶菜类叶绿素及蛋白质含量的保存是不同的，所以在贮藏时要选择最佳的贮藏条件，有利于蔬菜品质的保存及贮藏期的延长。 二、材料及用具 香菜（0℃下7天，常温下7天） 分光光度计、离心机、天平、10ml具塞刻度试管、试管架、研钵、滴管、离心管等，80%丙酮溶液、Tris缓冲液、考马斯亮蓝G-250溶液 三、操作步骤： 1、叶绿素的测定： （1）原理：叶绿素是脂类化合物，溶于丙酮等有机溶剂，用有机溶剂提取叶绿素，叶绿素a在波长645nm处有吸收高峰，叶绿素b在波长663nm处有吸收高峰，叶绿素a和b在波长652nm处吸收峰相交，两者有相同的吸光系数，均为34.5，因此在这一波长下测定其提取液的光密度，可测定总的叶绿素含量。 Ca=12.7OD663-2.59OD645 Cb=22.88OD645-4.67OD663 OD652 CT=-----------?1000 34.5 （2）叶绿素的测定: 将样品切碎，均匀取切碎的叶片0.5g，置于研砵中，加少许石英砂和2-3ml80%的丙酮，研磨匀浆，将提取液移入10ml刻度试管中，加80%的丙酮冲洗研砵几次，最后用80%的丙酮定容10ml。用离心机在5000转/分下离心5分钟，吸取上清液在波长652nm处比色，用80%的丙酮溶液做空白对照。 （3）计算： 叶绿素含量=P×V/M×1000（mg/g) P：由公式计算得叶绿素的质量浓度，mg/L V：样品提取液总体积，ml M：样品质量，g 2、可溶性蛋白质的测定 （1）原理：考马斯亮蓝G-250法是利用蛋白质染料结合的原理，测定微量蛋白浓度的方法。在游离状态呈红色，在稀酸中与蛋白质结合后变为蓝色，这种蛋白质染色剂复合物有较高的消光系数，故用比色法可以测定出可溶性蛋白质的含量。 （2）蛋白质标准曲线的制作 （3）蛋白质溶液的提取：将样品切碎，均匀称取切碎的叶片1.0g，置于研砵中，加入5mlTris缓冲液，研磨匀浆后，全部转移至离心管中，在12000转/分转速下，离心20分钟，取上清液备用。 （4）蛋白质含量的测定：取200μl上清液，放入离心管中，加800μl的蒸馏水，再加入5ml考马斯亮蓝溶液，2分钟后于波长595nm处比色，测其消光值。用1ml蒸馏水加入5ml考马斯亮蓝溶液作空白对照。 （5）通过标准曲线，查出香菜叶中蛋白质的含量。 标准曲线： m1=201.13OD-3.2654 R2=0.995 m1×V 样品中可溶性蛋白质的含量（mg/g）= —————— Vs×m×1000 m1：从标准曲线查得的蛋白质的质量，μg V：样品提取液总体积，ml Vs：测定时所取样品提取液体积，ml m：样品质量，g 四、结论与讨论 四、作业 1、通过实验，不同的温度处理对叶菜（如香菜）品质的影响有哪些？ 2、为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%丙酮溶液，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？ 3、测定果蔬组织中可溶性蛋白质含量有什么意义和用途？ * *