实验一植物叶绿素含量测定----丙酮提取法.docVIP

实验一 鱼类回避胁迫实验 一、实验目的 1. 了解污染物胁迫下鱼类的回避行为。 2. 学会用鱼类回避实验监测水体污染物的方法。 3. 了解回避反应的生理效应。 回避行为，是。有些化学物质甚至利用化学分析仪器都难以检测到，但通过回避试验，便能反映出水体的混合污染状况的实际毒性。人们利用鱼类的这种回避特性，设计控制不同浓度的污染区、非污染区(清水区)及污染混合区(污水与清水混合区)的模拟设施，借以检定鱼类的回避能力，对判定水污染状况和工业废水的处理程度，都有一定的实用价值。鱼类回避反应，是通过嗅觉、味觉、视觉，侧线及其他感受器而实现的。嗅觉器官可感受水中化学成分、食物及其他鱼类皮肤分泌物等所引起的化学刺激，是引起鱼类行为反应的重要器官之一。味蕾是感觉器，广泛分布于鱼类的口腔、触须及表皮等部位，对水中有些重金属离子(如汞、铜、锌等)，具有很高的敏感性。外界环境刺激而的短期的逃避行为。鱼类短期的转移与逃避环境中理化的恶化、水的变质1. 试剂： 0.2~2.0/L NH3水溶液 2. 材料： 非洲鲫鱼(Tilapiamossambica)为26.9克。试验前先经室内驯养七天以上。驯养期间每天投喂豆饼粉。3. 仪器与器皿： 自制的回避槽 四、实验步骤 1. 在回避槽中装入适量的清水，槽一端的污染区和对照区各放供试鱼20条。 2. 在污染区中投加NH3，打开阀门，观察鱼类是否逃避到回避槽另一端的混合区。如果没有鱼游走，继续增加NH3的投加量，直到有第一条鱼游到混合区。记录此时NH3的投加量，即为最小效应量。 3. 继续增加NH3的投加量，并同时计算游到回避槽另一端混合区鱼的数量。 4. 当供试鱼一半数量游到的回避槽另一端混合区时，记录此时NH3的投加量，即为半数效应量。 实验记录 NH3的投加量 对照区鱼的数量 污染区鱼的数量 混合区鱼的数量 回避率 回避率的计算 回避率率％＝ 五、思考题 1. 什么叫行为毒性？ 2. 污染导致鱼类回避行为对水生生态系统有什么影响？ 3. 在用鱼类回避实验进行化学物毒性评价时应注意什么问题？ 实验二 过氧化物酶活性（POD）的测定 一、实验目的 学习愈创木酚氧化法测定过氧化物酶。 二、实验原理 植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明，植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产生。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。 过剩自由基的毒害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。取0.2 Na2HPO4，87.7ml与0.2NaH2PO4，12.3ml混合。 μl，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30%过氧化氢19μl，混合均匀，保存于冰箱中。 （3）设备材料 分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100mL容量瓶，吸管，离心机 四、实验步骤 1.称取植物材料1g，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以400r/min 离心15min，上清液转入100mL容量瓶，残渣再用5mL磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。 2.取光径1cm比色杯2只，于一只中加入反应混合液3mL，作为对照，另一只加入反应混合液3mL和上述酶液1mL，（如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长470nm下的吸光度值，每隔1min读数一次。 四、结果计算 以每分钟内吸光度变化值表示酶活性大小，即ΔA470/[min·g (鲜重)]表示之，也可以用每min内ΔA470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(u)表示。 过氧化物酶活性[u/(g.min)]= 1、引起误的原因 2、实验数据的分析和讨论实验三 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿素含量也是指导作物栽培生产选育作物品种的重要指标。 原理叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量