含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的辛德毕斯病毒的制备与鉴定.pdfVIP

228 塑监床病毒学杂志2013年6月第27卷第3期 ChineseJExpClinVirol。June 2013．V01．27．No．3 技 术 方 法 ． 含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的 辛德毕斯病毒的制备与鉴定 邓玲玲，李江姣，尉研，王焕琴，张凤娟，孙继国，陈畅，朱武洋，梁国栋 【摘要】 目的 制备含有增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)报告基 因的辛德毕斯病毒，并对其进行鉴定。方法 采用融合PCR技术将报告基因EGFP融合到辛德毕斯 病毒 XJ一160感染性克隆pBR-XJ160的结构基因编码框后，并在报告基 因前面添加亚基因启动子 SP6，通过反向遗传学技术拯救得到EGFP标记的辛德毕斯病毒。结果 成功拯救并获得了EGFP标 记的XJ-160病毒，该重组病毒具有 良好的荧光表达特性和遗传稳定性。结论 EGFP标记的辛德毕 斯病毒可用于观测病毒的侵染轨迹，为进一步研究辛德毕斯病毒嗜性、生物学功能，以及感染机制奠 定 了基础。 【主题词】 Sindbis病毒；基因，报告；克隆，分子 ConstructionandcharacterizationofEGFP reportergenelabeled Sindbisvirus DENG Ling—ling’， LIJiangjiao，WEIYan，WANGHuan—qin，ZHANGFengjuan．sUN jig·uo，CHEN Chang ZHU Wu— yang，LIANGGuo—dong．’CollegeofLifeScienceTechnology，BengUniversityofChemicalTechnology， Be ng 100029，China Correspondingauthor：LIANGGuo—dD ，Email：gdliang@ hotmail．corn ；CHEN Chang，Email：cchen @ china．com 【Abstract】 0bjective ToconstructandcharacterizeEGFPreportergenelabeledSindbisvirus (SINV)．Methods ThereportergeneEGFPwasinsertedintothegenomeofinfectiousclonepBR-XJ160 byusingmulti-fusion longfragmentPCR method．Then apply reverse geneticmanipulation technique to rescueandobtainEGFP labeledSINV．Results W esuccessivelyobtainedlabeledSINV，whichhasgood fluorescentexpressioncharacteristicsandgeneticstability．Conclusion Thelabeledviruscanbeseen in livingcellsandlivingbody，andthisservesasagoodtoolforcellandtissuetropism andbiologicalfunction studyofviruses．Thisstudylaidafoundationofrfurtherstudyingthecelltropism ，biologicalfunctionsand infectionmechanism ofSINV． 【Keywords】 Sindbisvirus；Genes，reporter；Cloning，molecular 辛德毕斯病毒 (Sindbisvirus，SINV)是披膜病毒 基因组感染性 cDNA克隆pBR—XJ160的构建 。 科 (Togavirudea)甲病毒属 (Alphavirus)的代表毒株 。 为了进一步研究辛德毕斯病毒的感染机制 ，本 该病毒为温和型病原体 ，并且在基因组结构、复制和 研究构建 了携带报告基 因EGFP的辛德毕斯病毒。 翻译方面等均体现了动物病毒的典型特征，因此成