以具有WPRE调控元件的杆状病毒为载体在鸡胚原代细胞中表达新城疫病毒F基因.pdfVIP

Short Communication 研究简报 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 54 (4 ) :455 － 462 ; 4 April 20 14 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi : 10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 14 . 04 . 00 ? 以具 有 WPRE 调控 元件 的杆 状病毒 为 载体在鸡胚 原代细胞中 表达新城疫病毒 F 基 因 * ， ， ， ， ， ， ， ， 高冬妮 平文祥 金丽颖 沈万力 宋 刚 唐 晓艳 安琦 申燕 葛菁萍 ， ， 150080 微生物 黑龙 江 省 高校 重点实验室 黑龙 江 大学生命 科学学 院 黑龙 江 哈尔滨 : 【 】 ， 摘要 目的 构 建 具有 哺 乳 动 物 细 胞 特 异性 启 动 子和基因 转 录 后 调 控 元 件 的重组 杆 状 病 毒 转 移 载 体 优化 的重组杆状病 毒可介 导新城 疫病 毒 (Newcastle disease virus ，NDV) F 基因 在鸡 原代骨骼 肌 细胞 中进行 高效表 。 【 】 NDV La Sota RNA ， RT -PCR F ， 达 方法 提 取 株病 毒 基因组 用 技术 扩增 基因 将 其 克 隆到 自主 构 建 的具 有转录 后调控 元件 (Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element ，WPRE ) 的杆状 病 毒 转 移 CMV ， Bac-to-Bac F Bacmid ， Sf9 F 载 体 的 启动 子下游 通 过 系统 获得 重组 经 转染 昆虫 细 胞 后获 得 重组 杆 状 。 50 MOI ， 72 h 。 病 毒 重组病 毒经扩增 后 以 个 感 染鸡 原代骨骼 肌 细 胞 接 种 后 裂 解 细 胞 收 获 蛋 白 比较 分 析 WPRE 。 【 】 Western blot NDV F 调控 元件对 蛋 白表达 水平 的影响 结果 经 证 实在鸡 原代 骨 骼 肌 细 胞 中表 达 了 ， 56 kDa ， ， NDV 。 WPRE 蛋 白 分子量 约 与预 测 蛋 白大小一 致