分子伴侣BiP结构域分析及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(11): 1204– 12 12 http ://www.cj BiP 分子伴侣 结构域分析及对肝癌细胞增殖 和凋亡的影响 李祥柱　刘艳娜　赵文君　周菁华　郭风劲* ( , , 400016) 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室 重庆医科大学分子医学及肿瘤研究中心 重庆 摘要 结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein, BiP), 是Hsp70 (70 kilodalton heat shock proteins)蛋白家族的成员之一, 是内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)主要的调 BiP BiP DNA 节器。为了研究 的分子结构与生物学功能的关系, 首先, 分析 的 序列和蛋白质空间构 PCR ATPase peptide-binding (BiPa 象, 接着利用重叠 方法分别克隆 结构域缺失体和 结构域缺失体 和 BiPp) myc LO2 SMMC-7721 , 成功构建带 标签的真核表达载体, 转染 细胞和 细胞, 应用免疫印迹方法 检测其在细胞内的表达; 运用MTT法、BrdU免疫组化法及流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋 BiP SMMC-7721 DNA 亡; 检测 及两个组成结构域对 细胞增殖和凋亡的影响。酶切、电泳和 测序结 BiP BiP LO2 果显示, 全长和两个缺失体的真核表达载体构建成功; 免疫印迹检测到 三种真核载体在 细胞和SMMC-7721细胞中均能正确表达; MTT和BrdU免疫组化结果表明, BiP全长和缺失体BiPa 、 BiPp三种真核载体均能有效促进SMMC-7721的增殖, 各组间细胞增殖率结果分析提示ATPase功 能域可能抑制细胞增殖, 而peptide-binding结构域可能促进细胞的增殖; 流式细胞仪结果显示, 转染 BiP BiPa BiPp SMMC-7721 BiPa BiP 、 、 三种真核载体均可以促进 的凋亡, 缺失体 与全长 组间凋亡率 ; BiPp BiP (P0.05); 差异不显著 而缺失体 组细胞凋亡率明显低于全长 组, 两组差异具有显著性 提示 ATPase功能域与细胞凋亡可能不相关, 而peptide-binding结构域可能促进细胞的凋亡。上述结果表 明, BiP的两个组成结构域: ATPase功能域与peptide-binding结构域, 独立存在或者共同存在时, 调控 ; 细胞增殖与凋亡具有差异性 当两个结构域共同存在时, 它们会协同调控细胞的增殖与凋亡, 具体 的分子机制还需要进一步的实验研究和探讨。