BMP9对体外模拟骨微环境中乳腺癌细胞迁移和凋亡的影响及其机制探讨.pdfVIP

肿瘤2013 年8 月第33 卷第8 期　TUM OR Vol. 33, August 2013　　 663 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2013.08.001 Copyright© 2013 by TUM OR Basic Research 基础研究 · BMP9对体外模拟骨微环境中乳腺癌细胞迁移和凋亡的影响及其机制 探讨 王　维，陈莹莹，刘月红，万绍恒，张志慧，王　婷，张　彦 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆　400016 [摘要]　目的：采用体外共培养技术模拟骨微环境，研究人骨形态发生蛋白9 （bone morphogenetic protein 9， BMP9 ）对人高骨转移性乳腺癌MDA-MB-231 细胞迁移和凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法：将重组腺 病毒AdBMP9 导入MDA-MB-231 细胞中，与骨髓基质细胞HS-5 在Transwell 共培养体系中培养3 d 。然后，采 用划痕愈合实验、Transwell 小室和FCM 法检测MDA-MB-231 细胞迁移和凋亡的变化；RT-PCR 法检测共培养 的2 种细胞中基质细胞衍生因子-1 （stromal cell derived factor-1，SDF-1 ）、白细胞介素-6 （interleukin- 6 ，IL-6 ） 和单核细胞趋化蛋白-1 （monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1 ）等转移相关因子的水平；细胞免疫荧光 法检测MDA-MB-231 细胞中趋化因子受体CXCR4 的表达；蛋白质印迹法检测2 种细胞中SDF-1/CXCR4-PI3K 信号通路关键分子的表达水平变化。结果：在模拟骨微环境的共培养体系中过表达BMP9 后，乳腺癌MDA- MB-231 细胞的迁移受到明显抑制 （ P ＜0.05 ），而肿瘤细胞凋亡增加 （P ＜0.001 ）。过表达BMP9 后，骨髓 基质HS-5 细胞中转移相关因子 SDF-1、IL-6 和MCP-1 表达显著下调 （P ＜0.05 ），但MDA-MB-231 细胞中 SDF-1 表达水平无明显变化，IL-6 和MCP-1 的表达也明显下调。另外，MDA-MB-231 细胞中本身CXCR4 阳 性，BMP9 过表达对MDA-MB-231 细胞中CXCR4 表达无明显影响，但可以下调其配体SDF-1 在HS-5 细胞中 的表达水平，且MDA-MB-231 细胞中磷酸化的Akt （phosphorylated Akt ，p-Akt ）水平也被下调 （ P ＜0.05 ）。 结论：模拟骨微环境的共培养体系中，BMP9 过表达可以调节乳腺癌细胞与骨髓基质细胞的相互作用，抑制乳腺 癌MDA-MB-231 细胞的迁移，并促进其凋亡，且该抑制作用可能与SDF-1/CXCR4-PI3K 信号通路有关。 [关键词]　乳腺肿瘤；肿瘤转移；骨形态发生蛋白质类；骨髓细胞；细胞迁移分析；细胞凋亡；模拟骨微环境 [中图分类号]　R737.9 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2013) 08-0663-07 Effects of human bone morphogenetic protein 9 on migration and apoptosis of human breast cancer cells in simulated bone microenvironment in vitro WANG Wei, CHEN Ying-ying, LIU Yue-hong, WAN Shao-heng, ZHANG Zhi-hui, WANG Ting