缺氧损伤对新生大鼠海马神经干细胞细胞活力及分化潜能的影响.pdfVIP

维普资讯 医学临床研究 2007年 7月 第 24卷 第 7期 JClinRes，Ju1．2007，V。124，No7 · 论著 · 缺氧损伤对新生大鼠海马神经干细胞细胞活力及 分化潜能的影响 刘锋 胡红鹃 余华象 (南华大学研究生处，湖南 衡 阳 421001) [摘要]【目的】通过建立缺氧损伤模型，观察缺氧损伤对神经干细胞活力及分化潜能的影响。 【方法】采 用机械吹打、无血清悬浮培养，95 N 、5 CO 比率的缺氧气体体外分离培养新生大 鼠海马神经干细胞，建 立缺氧模 型，免疫细胞化学鉴定神经干细胞及其分化后 的细胞类型，MTT、LDH等方法比较缺氧培养后神 经干细胞的变化 ，并观察缺氧培养 l、2、4、6、8h后神经元分化 的比率。 【结果】新生大鼠海马可分离出的大量 细胞 Nestin染色阳性 。证实为神经干细胞 ，分离出的神经干细胞可分化为神经元、胶质细胞等神经细胞类型； 95 N 、5 ) 比率的缺氧气体培养 6h后神经干细胞 MTT值 由缺氧前0．368±0．104降至 0．268±0．07l (P0．05)，LDH 漏 出量 由缺氧前 l0．369±0．379unit／(m1．min)增加到 l3．987±l_240unit／(m1．min) (P0．05)；神经元的分化 比率稍增加 ，但无显著差异 (P0．05)。 【结论】新生大鼠海马 内提取 的细胞为神 经干细胞 ，神经干细胞缺氧培养 6h后可以建立神经干细胞缺氧损伤模型，短时间缺氧培养对细胞分化 的类 型无 明显改变 。 [关键词] 干细胞 ； 细胞分化 ； 细胞低氧 ； 大鼠 、 TheEffectofHypoxiaon theVigorandDifferentiatedAbility ofNeuralStem Cellsfrom New Born SD Rats LIU Feng， HU Hong—juan。 Hua一r．iang (PostgraduateDepartmentof NanHuaUnivisity，Hunan 421001，China) rAbstract~[()bjective]ToisolateandcultureNSCsfrom hippocampusofnew bornSDrats，establishthe hypoxiamode1，andinvestigatetheregulationofoxygendeficiencyontheproliferationandorientatingdifferen— tiationOfNSCs．【Methods]ThebraintissuesofSDratweredissociatedmechanically．eel1suspensionswere cultivatedwith serum —freeculturemedium bysuspensionculturetechniqueinordertoacquirelargenumbers ofselfproliferatingcellclones．Immunocytochemicalstainingsofanti-Nestin，NF-I，GFAP wereusedto iden— tifythecells．NSCswereexposedto5 ()?forlh，2h，4h，6hor8h．ProliferationofNSCswereobservedafter hypoxiabyMTT andI．DH methodandtheratioofthedifferentiatedneurons，morphologicalchangeswerede— tected．[Results]NSCsdissociatedftom SD ratcoulddifferentiateintoneuronsandastrocytesetc．After6 hoursofhypoxia，the()D valuewasdecreasedfrom (0．368±0．104)beforeanoxiatO(0．268±0．071)，theef- fluxesofLDH wereincrea