药物中间体R-丁酸缩水甘油酯生物法拆分研究.pdfVIP

药物中间体R一丁酸缩水甘油酯的生物法拆分研究 摘要 本文基于酶所特有的对映选择性催化性能，用猪胰脂肪酶催化水 解手性化合物丁酸缩水甘油酯，以期获得高纯度的(R)一丁酸缩水甘 油酯。对水相、有机溶剂中酶法拆分的工艺条件进行了摸索性实验， 并且用曲面响应法对磷酸缓冲液中酶促水解丁酸缩水甘油酯的工艺 条件进行了优化：为了更高效地利用脂肪酶， 对猜胰脂肪酶进行了 固定化工艺的研究，比较了纳米材料Si02吸附法与海藻酸钠包埋法 固定化脂肪酶的优缺点：考察了纳米SiO：吸附法的同定化条件对酶 活力的影响，研究了固定化酶的基本特性；为了更进+步了解该固定 化酶的实际应用情况，本实验采用了单因素与正交试验相结合的方法 对固定化酶对映体选择性水解丁酸缩水甘油酯的工艺进行了优化。 实验结果表明，在磷酸缓冲液体系中缓冲液初始口H值为7．5， 底物浓度为0．4mol／L，酶用量30 mg／(g底物)，反应时间为4．0h，反 应温度在30 6C，振荡频率为150r／rain的条件下脂肪酶酶促水解的拆 分效果最好，对映体过量值为84．65％，相对应的转化率为51．78％o。 经曲而响应法优化后最适条件为底物浓度0A99mol／l；酶用量 50r／rain， 30．2mg／g底物；温度29．7℃；pH7．6：时间为4h；振荡频率为l 此条件下酶促拆分的对映体过量值达到93．28％。 有机溶剂一水双液相体系中脂肪酶对映选择性拆分丁酸缩水甘油 酯的最佳反应条件为：溶剂为环己烷，含水量6％，pH7．8，底物浓 度O．7tool／1。 脂肪酶的固定化研究实验表明：纳米SiO：吸|_；『j法同定化猪胰脂 ℃与酶液以体积比1：2混合吸附，得固定化酶的酶活最高，比酶活为 19．67U／g，酶活回收率82．9％。而海藻酸钠包埋法同定化酶酶活回 收率只有54．25％。与游离酶相比，纳米Si02吸附法所得固定化酶的 最适pH增大0．2个pH单位，为pH7．6；最适温度提高了5。C，达到 50C；热稳定性与贮存稳定性均有明显改善；固定化酶的表观米氏常 数Km=0．37×10 29／L，游离酶Km：1．01×1029／L；固定化酶用于催化橄 榄油水解，重复10次后酶活保留达59．7％。用该围定化酶催化拆分 丁酸缩水甘油酯的最适工艺条件为温度30℃：初始DH7．8；底物溶 关键词脂肪酶，丁酸缩水甘油酯，手性拆分，固定化酶，曲面响应 法 ABSTRACT isbasedOilthe of enantioselectivethis It theory catalyzed hydrolysis．In lipase Porcine of wasachieved resolutionaracemic butyrate by paper,efficient glycidyl tO Pancreatic conditions technological hydrolyzation，The Lipase(PPL)catalyzed