大肠杆菌TrmB和抗ErbB2抗体chA21结构生物学研究.pdf

摘要 摘要 tRNA的成熟是一个包含了许多种转录后修饰的复杂过程。其中，可变环46 位鸟嘌呤第7位N原子上的甲基化(m7G46)修饰是少有的几个能在碱基上引 入正电荷的修饰之一。m7G46修饰广泛地存在于几乎所有细菌、真核生物和部 出现时，酵母细胞内的tRNA会被快速降解。 的高分辨率晶体结构。与其它先前报导的形成同源或异源二聚体的TrmB相似， EcTrmB也折叠成同一种修饰过的Rossma皿折叠模式。但是，在对功能至关重 要的一段TnnB特有的插入序列处，Ecll彻B的结构与其同源蛋白质存在明显差 异。在Ecl’册B中，这段插入序列的COOH一端与S腺苷甲硫氨酸的结合口袋分 离开若干埃，破坏了G46碱基的结合口袋。这暗示了，EcTrmB的这段插入序列 可能需要经历一个结构重排才能结合和催化G46碱基。在先前报导的同源二聚 化的TrmB中，二体中的另外一个亚基可以阻止这段插入序列与S腺苷甲硫氨酸 的结合口袋的分离。在对应于其它同源二聚体TmB的二聚化结合面处，EcTrmB 生空间排斥阻止Ecl’衄B形成类似的同源二聚体，这可能是EcmmB以单体形式 存在的重要原因。 如今，ErbB2已经变成了肿瘤治疗的重要靶标。中国科学技术大学刘兢教授等开 发了一种抗ErbB2的嵌合抗体c也蛇1。体内、体外实验均表明，cl此1能够特异 性地抑制ErbB2过表达的肿瘤细胞的生长。我们使用坐滴气相扩散法结晶了 为EPI)的复合物。复合物络构显示scFv的互补决定区的六个loop构成了一个 大的口袋结合EPl上位于ErbB2二聚化结合面背面的三段不连续的loop。整个 抗原一抗体结合面含有17对氢键和172个范德华相互作用。cl妣1被发现能够 强烈地下调细胞表面ErbB2的水平，而且这种下调活性需要c}此1的二价性。 我们提出了一个模型：cm墟1可以通过它的两个scFv片段同时结合两个属于不 同二聚体的ErbB2受体，并将这些二聚体交联成一个大复合物。这种大复合物 能构被细胞自身发现，并内吞和降解，导致细胞ErbB2水平的降低。 摘要 古细菌的转录系统采用真核生物类型的RNA聚合酶和细菌类型的转录条件 因子。NusG是少数几个在细菌、古细菌和真核生物等细胞生命的三个域中都发 挥重要作用的转录因子。古细菌NusG的结构域组成与细菌NusG相似，包含一 个NGN和一个KOW结构域，远较其在真核生物中的直系同源蛋白质Spt5简单。 但是，最近我们实验室的数据显示，古细菌NusG可以与rpoE蛋白质形成复合 物。这一性质与真核生物Spt5．Spt4复合物相似。 在本论文中，我们报导了古细菌胁砌以甩Dc口胁cDcc姗尬，z，2傩砌ffNusG的NGN 结构域的晶体结构。MjNGN采用a．B．a的三明治折叠模式，不具肓细菌NGN的 附加结构域。在晶体和溶液中，MjNGN均能够形成同源二聚体。实验数据表明， 的复合物结构模型，并用突变分析验证了模型的正确性。最近，我们初步解析了 MiNusG．rpoE”复合物的晶体结构，进一步的结构和生化功能分析还在进行中。 关键词：S一腺苷甲硫氨酸甲基化转移酶单体结构重排单链抗体单链嵌合抗 体抗原一抗体复合物古细菌转录因子x一射线衍射晶体结构 II Abstract T1lematurationoftRNAsisa numerous complexprocessinVolVing post- modifications． at transcriptional modification 46 N7一methylguanosine position theVariable of few (m7G46)i11 isonethe modificationsthatintroducea loop