小鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小鼠背神经上皮和背根神经节中的表达.pdfVIP

维普资讯 23卷 6期 生 物 工 程 学 报 Vo1．23 No．6 2007年 11月 ChineseJournalofBiotechnology November 2oo7 小 鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小 鼠背神经上皮和背根神经节 中 的表达 Preparation ofM ouseKCTD10Antibody andExpression AnalysisofKCTD10 in Neuroepithelium ofNeuralTube andDorsalRootGanglion 孙吉康 ，张 波 ，张 健 ，周建林 SUNJi—Kang ，ZHANG Bo ，ZHANG Jian andZHOU Jian—Lin 1湖南师范大学生命科学学院，蛋白质与发育生物学教育部重点实验室，长沙 410081 2湖南 中医药大学 ，长沙 410007 1KeyLaboratoryofProteinChemistry andDevelopmentalBiologyofEducatoin ，打yofChina，CollegeofUfeSciences，HunanNormalUniversity，Changsha 41008l，China 2HunanUniversityofTradtiionalChineseMedicine，Changsha410007，China 摘 要 KCTD10蛋 白是一个 TNF—a诱导表达的蛋 白，能与 DNA聚合酶 6的小亚基和 PCNA相互作用。但其具体功能 尚不清 楚。为 了研 究 KCTD10的功 能 ，用 小 鼠 KCTD10融合 蛋 白免疫新 西兰大 白兔获得 免抗 鼠 KCTD10多克 隆抗 体。 由于小 鼠 KCTD10蛋 白与小鼠PDIP1蛋 白和 TNFAIP1蛋白有较高的蛋白序列相似性，KCTD10抗体 同PDIP1蛋 白、TNFAIP1蛋 白有抗体交 叉反应 。将 同源蛋 白PDIP1和 TNFAIP1的部分降解片段与抗 KCTD10血清在4℃下孵育3h从而消除非特异性抗体 ，成功地消 除 了KCTD10多克隆抗体 对 PDIP1蛋 白和 TNFAIP1蛋 白的交叉反 应 。用此 抗体 做 小 鼠胚 胎 及胚 胎切 片的免 疫组 化 ，发 现 KCTD10蛋 白在 El2．5d的小 鼠胚胎背根神经节 以及神经管神经上皮 中有 明显的表达。该结果提示 KCTD10可能在小鼠的神 经管神经上皮和背根神经节发育 中发挥作用。 关键词 KCTD10，抗体交叉反应 ，免疫组化 ，神经管神经上皮，背根神经节 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2007)06—1011-06 Abstract KCTD10 isaTNF—ainducibleproteinthatcaninteractwiththesmallsubunitofDNA polymerase8and PCNA ．In ordertostudythefunctionofKCTD10，wepreparedtherabbitanti—mouseKCTD10polyclonalantibody byusingtheHis-tagged recombinantmouse KCTD10 protein to immune New Zealand white rabbit．Mouse KCTD10 sharessignificantsimilarity with PDIP1(polymerasedelta．interactingprotein1)andTNFAIP1(tumornecrosisfactoralpha—inducedprotein1)protein，andthen KCTD10 polyclonalantiserum possesses CroSS—reactivity with PDIP1 protein and TNFAIP1protein．The partially digested fragmentsofhomog